草甘磷是一些除草剂的活性成分。农作物被洒到除草剂，也会死亡。草甘磷抗性基因能使植物对草甘磷...

草甘磷是一些除草剂的活性成分。农作物被洒到除草剂，也会死亡。草甘磷抗性基因能使植物对草甘磷具有抗性。如果这个基因能通过基因工程转入农作物中，就能使农作物即使被洒到除草剂也能存活。现有植株A、B、C、D、E、F，其中A和D对草甘磷敏感，B和E天然具有抗性，C和F经过了转基因处理，但是否有效仍然未知。植株A、B和C浇清水，D、E和F浇的水中含有草甘磷成分的除草荆。

(1)假设草甘磷抗性基因被转移到植株F中并成功表达。预测D、E和F在浇了草甘磷后是否能健康生长，并说明理由。________。

(2)要检测植株F的DNA中是否插入了草甘磷抗性基因，需要运用____方法。该方法需要用到探针，探针是指____。F植株浇的水中含有草甘磷成分的除草剂用于检测转基因是否成功，这属于 ___水平的检测。

(3)基因工程除了可用于抗除草剂植物的培养，还可用于进行基因治疗。基因治疗包括有________________________________________。

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草甘磷是一些除草剂的活性成分，使用时需要加入少量的洗衣粉作为表面活性剂。一种特定的基因对草甘磷具有抗性，如果这个基因能通过基因工程转入农作物中，就能使农作物即使被撒到除草剂也能存活。为了检测转入农作物中的目的基因是否表达，某同学随机选取了对草甘磷敏感的植株（A、D）、对草甘磷天然具有抗性的植株（B、E）和转入抗草甘磷目的基因的转基因植株（C、F），进行实验，观察并记录植株的生长情况如下图。据图分析，下列叙述中正确的是　　 （　　　 ）

A．实验组叶面定时喷洒一定浓度的草甘磷溶液，对照组则不作任何处理

B．实验结果表明转入植株C、F的草甘磷抗性基因已成功表达

C．自然种群中存在对草甘磷天然具有抗性植株（E）的根本原因是基因重组

D．长期使用草甘磷，将导致农作物中抗草甘磷基因频率的定向改变

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草甘膦是一种广泛应用的除草剂，能不加选择地杀死各种杂草和农作物。研究发现，某种植物对草甘膦具有抗性，将该种植物的抗草甘膦基因转入油菜中，使油菜能抗草甘膦。在转基因油菜种植多年后，该地域未使用草甘膦的野生油菜约有80%含有抗草甘膦基因。下列叙述中不正确的是

A．人们培育出转基因油菜的育种原理是基因重组

B．转入抗草甘膦基因，可为油菜的进化提供原材料

C．大量使用草甘膦，降低了物种的多样性

D．野生油菜中含抗草甘膦基因是自然选择的结果

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（13分）回答下列有关基因工程问题。

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是是否成功还未知。若A-C浇清水，D-F浇的水中含有草甘膦，上述植物中，肯定能健康成长的是_________。

（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

图所示的酶M和酶N是两种限制酶，图中DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。

酶M特异性剪切的DNA片段是 ，则酶N特异性剪切的DNA片段是　　　　　　 。

多个片段乙和多个片段丁混合在一起，用DNA连接酶拼接得到环状DNA，其中只由两个DNA片段连接成的环状DNA分子有　　　　　　　 种。

图的A和B分别表示两段DNA序列。表格分别表示4种限制性核酸内切酶的酶切位点。

（3）据图：假设位于EPSPS基因两侧的DNA序列均如图A所示，则应选择表格中酶__________进行酶切；若位于EPSPS基因两侧的DNA序列分别如图A和B所示，则应选择表中酶__________进行酶切。

（4）假设大肠杆菌突变菌株甲中EPSPS基因的右侧序列如图B所示，请在方框内画出经酶切后产生的两个末端的碱基序列。（2分）

图甲是目的基因EPSPS（4.0kb，1kb=1000对碱基）与pUC18质粒（2.7kb）重组的示意图。图中Ap′是抗氨苄青霉素基因，lacZ是显色基因，其上的EcoRI识别位点位于目的基因插入位点的右侧，其控制合成某种酶能将无色染料X-gal变成蓝色，最终能在含无色染料X-gal的培养基上将含该基因的菌落染成蓝色。（图乙中深色圆点即为蓝色菌落）

（5）将处理后的目的基因EPSPS与pUC18质粒、DNA连接酶混合后，再与某菌种混合，若要从混合物中筛选出含EPSPS基因的菌株，在图三十二乙的培养基中必须加入　　　　　　　　　　　　　　 。请判断图乙中所出现的白色和蓝色两种菌落中，何种颜色菌落会含有重组质粒___________。

（6）现用EcoRI酶切质粒，酶切后进行电泳观察，若出现长度为_________kb和　　　　 kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功。（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRI的识别位点之间的碱基对忽略不计）。假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F仍没有表现出抗性，分析可能的原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，最终导致植物死亡。但是，它的使用有时也会影响到农作物的正常生长。目前，已发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入农作物植物细胞内，从而获得的转基因植物就能耐受高浓度的草甘膦。

（1）下图A-F表示6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，但是否成功还未知。若ABC浇清水，DEF浇的水中含有草甘膦，上述DEF植物中，肯定能健康成长的是　　　　　　　　　 。

（2）限制酶是基因工程必需的工具酶，其作用是。

（3）将图1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有　　　 种DNA片段。

（4）假设图1中质粒原来BamHⅠ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclⅠ的碱基序列，现用BclⅠ和HindⅢ切割质粒，则该图1中①的DNA右侧还能选择BamHⅠ进行切割，并能获得所需重组质粒吗？　　　　　　 请说明理由　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（5）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒（　　　　 ）

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切开

B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切开

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切开

D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切开

（6）图2中不同组织细胞的相同DNA进行过程③时启用的起始点　　　　　　　　　　 （在“都相同”、“都不同”、“不完全相同”中选择），其原因是　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（7）要想检测导入的EPSPS基因是否表达，在分子水平上可用　　　　　　　　　　 方法进行检测。

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草甘膦是一种可以杀灭多种植物（包括农作物）的除草剂。草甘膦杀死植物的原理在于能够破坏植物叶绿体或质体中的EPSPS合成酶。通过转基因的方法，让农作物产生更多的EPSPS酶，就能抵抗草甘膦，从而让农作物不被草甘膦杀死。下列有关抗草甘膦转基因大豆的培育分析正确的是

A．可通过喷洒草甘膦来检验转基因大豆是否培育成功

B．只能以大豆受精卵细胞作为基因工程的受体细胞

C．在转基因操作过程中一定要用同一种限制性核酸内切酶

D．只要EPSPS合成酶基因进入大豆细胞，大豆就会表现出抗草甘膦性状

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草甘膦是一种可以杀灭多种植物(包括农作物)的除草剂。草甘膦杀死植物的原理在于破坏植物叶绿体或质体中的EPSPS合成酶。通过转基因的方法，让农作物产生更多的EPSPS酶，就能抵抗草甘膦，从而让农作物不被草甘膦杀死。下列有关抗草甘膦转基因大豆的培育分析正确的是

A．只能以大豆受精卵细胞作为基因工程的受体细胞

B．可通过喷洒草甘膦来检验转基因大豆是否培育成功

C．在转基因操作过程中一定要用同一种限制性核酸内切酶

D．只要EPSPS合成酶基因进入大豆细胞，大豆就会表现出抗草甘膦性状

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草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，影响植物正常生长，最终导致植物死亡。目前，发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，获得的转基因植物能耐受高浓度的草甘膦。取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过转基因处理，但是否成功未知（转基因处理过程不影响植物正常生长）。图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有限制酶切点。据图回答：

（1）若A、B、C浇清水，D、E、F浇含有草甘膦的水，则A～F植物中，一定能正常生长的是_________________。

（2）一个完整的基因表达载体除复制原点、启动子和终止子外，还应包括_________________。若利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是_________________和_________________。

（3）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F没有表现出抗性，分析可能的原因_________________。

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为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株，获得抗草甘膦转基因水稻。

（1）将草甘膦抗性基因作为_____，与Ti质粒用相同的_____和DNA连接酶处理构建基因表达载体。

（2）用_____处理农杆菌后获得感受态细胞，将其与基因表达载体混合完成转化后，在添加_____的培养基中，经筛选1得到含基因表达载体的农杆菌。

（3）利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：

5'﹣﹣﹣ATGGCT………AGGAAC﹣﹣﹣3'

3'﹣﹣﹣TACCGA………TCCTTG﹣﹣﹣5'

根据上述序列应选择引物_____（填字母）进行PCR。

A．引物：5'﹣TACCGA﹣3'

B．引物：5'﹣GTTCCT﹣3'

C．引物：5'﹣AUGGCU﹣3'

D．引物：5'﹣ATGGCT﹣3'

（4）PCR扩增时需要根据草甘膦抗性基因序列设计_____种引物，其原因是_____。

（5）除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外，还可以利用GUS基因表达产物的鉴定进行图中的筛选2，以确定目的基因是否_____。两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的_____过程，获得转基因水稻。

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为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株，获得抗草甘膦转基因水稻。

注：GUS基因表达产物经染色能从无色变成蓝色

（1）将草甘膦抗性基因作为________，与Ti质粒用相同的______和DNA连接酶处理构建基因表达载体。

（2）用________处理农杆菌后获得感受态细胞，将其与基因表达载体混合完成转化后，在添加_____的培养基中，经筛选1得到含基因表达载体的农杆菌。

（3）取某品种水稻的幼胚，先进行_______处理，然后接种到培养基中，水稻幼胚细胞发生___________形成愈伤组织。用含基因表达载体的农杆菌侵染该愈伤组织。

（4）利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：

5’---ATGGCT………AGGAAC---3’

3’---TACCGA………TCCTTG---5’

根据上述序列应选择引物_________（填字母）进行PCR。

A.引物：5’-TACCGA-3’　　　　　　　 B.引物：5’-GTTCCT-3’

C.引物：5’-AUGGCU-3’　　　　　　　 D.引物：5’-ATGGCT-3’

（5）除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外，还可以利用GUS基因表达产物的鉴定进行图中的筛选2，以确定目的基因是否____。两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的________过程，获得转基因水稻。

（6）为获得具有抗除草剂性状的转基因水稻，还需要在个体水平进行抗性测试。请你设计一个实验方案，筛选出对草甘膦具有抗性的转基因水稻。_____

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