大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌，用于指示食品、饮用水等是否直接或间接受到了粪便的污染...

大肠杆菌是国际上公认的卫生监测指示菌，用于指示食品、饮用水等是否直接或间接受到了粪便的污染。少数微生物能分解乳糖，有些只产酸（酸性物质），有些只产气（气体），而大肠杆菌既能产酸又能产气，且产生的酸性物质能与伊红美蓝反应而呈现黑色。某小组为检测某水体中大肠杆菌的污染状况，选用了如下两种培养基。

回答下列问题：

（1）从物理性质上看，两种培养基的类型__________（填“相同”或“不同”）。在乳糖蛋白胨培养基中，为微生物的生长提供氮源的物质有__________；NaCl除了提供无机盐外，还具有_________作用。

（2）乳糖蛋白胨培养基进行灭菌时，不选用121℃高压灭菌15 min的方法，而是选用115℃灭菌20 min，推测可能的原因是___________。

（3）某小组取两支含乳糖蛋白胨培养基的试管A和B，A管中加入1mL待测水样，B管不作处理，然后都放入培养箱中培养24h。已知溴甲酚紫在酸性时呈黄色，碱性时（pH高于6.8）呈紫色。若出现_________时，则提示水样可能被大肠杆菌污染。

（4）该小组为计数大肠杆菌的数目，同时还各取0.1 mL水样直接涂布到三个伊红美蓝平板培养基上进行培养，分别统计平板上的菌落数为34、36、38，估算出每毫升水样中含360个大肠杆菌。有同学指出，估算的大肠杆菌数目不可信，其原因有___________、__________。

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大肠杆菌是一种常见细菌，在饮用水的检测中常用它作为水源是否受到污染的指示菌，在遗传学上常作为实验材料，在基因工程中常用它作为受体细胞，为人类的健康和科学技术的发展作出了许多贡献。请回答下列有关大肠杆菌的问题：

(1)大肠杆菌培养过程中除营养条件外，还要考虑渗透压、___________和___________等条件。该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、____________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。

(2)微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行___________(填“消毒”或“灭菌”)；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_______________。

(3)用稀释涂布平板法计数活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品___________稀释。

(4)通常对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的　 _______________。

(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过__________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。

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大肠杆菌含有 2000 种以上的蛋白质，是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

(1)在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有______。

(2)通过滤膜法（自来水过滤后的滤膜置于伊红-美蓝培养基中，再进行计数）可以测定自来水中大肠杆菌的数目，伊红-美蓝培养基的主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液，蛋白胨的作用有___________。（写两点），这种测定方法的主要原理是______，在实验接种前通常需要检测固体培养基______ （填是否）灭菌合格。

(3)大肠杆菌在_______中合成蛋白质，利用______分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质。

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根据所学知识回答下列问题:

（1）大肠杆菌菌群数是我国通用的食品污染常用指标之一，能够反映食品是否卫生。

牛肉膏蛋白陈培养基可用来分离纯化大肠杆菌，其中牛肉膏可以为微生物提供的主要营养是:磷酸盐、

和维生素。对新配制的培养基进行彻底灭菌时，应采取　　　　　　 灭菌法。为了统计样本中大肠杆菌菌群数，可用　　　　　　　　　　 法将样本接种于固体培养基上培养、计数。

（2）菊花组织培养过程中发现部分菊花茎段边缘出现了杂菌，其余部分正常，未接种的培养基也正常，出现该现象的原因最可能是　　　　　　　　　　　　 ，生根培养所用的培养基生长素用量与细胞分裂素用量的比值要　　　　　　　 （高/低/适中）。

（3）按树油一般从新鲜的按树叶中提取，过程如下:

提取按树油采用的方法是　　　　　　　 ，在分离油层时要加入NaCI，其作用是　　　　　　　 ，分离油层后，再加入　　　　　　　 除水。

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回答下列（一）、（二）两小题

（一）大肠杆菌是生存在人体肠道中的正常菌群，每克粪便中含有109个，且能够与致病菌混杂生长。如果食品和饮用水中出现大肠杆菌，就意味着食物可能被粪便污染而带上致病菌，因而常将大肠杆菌的数量作为食品卫生的检测指标之一。请据此回答下列问题：

（1）大肠杆菌异化作用的类型是________，大肠杆菌在肠道中一般对人无害，但如果进入人的___________，就会对人体产生危害。

（2）测定街边出售的奶茶中大肠杆菌的数目，常用涂布分离法进行测定。在操作过程中错误的是_______

A．将涂布器从70%酒精中取出后需放在酒精灯火焰上灼烧

B．涂布时需转动培养皿以使涂布均匀

C．每一浓度需设多个培养皿进行涂布

D．也可以利用划线分离法进行测定

（3）根据菌落测出的大肠杆菌数比实际数值要___(高、低)，原因是___________________。实验完成后需要对培养基进行_________处理，然后才能倒掉。

（二）动物细胞培养的过程是：

组织→单个细胞的悬浮液→原代培养→传代培养

（1）此过程的原理是_____________，将培养瓶放入____________培养。

（2）培养的条件除了充足的营养供给、适宜的温度和气体环境，还有____________。在培养的过程中_______（需要/不需要）再用胰蛋白酶。

（3）传代培养得到的细胞系具有_______性。关于细胞系和细胞株下列说法错误的是______

A．原代培养得到的细胞也可以是细胞系

B．细胞系是具有特殊性质的细胞株

C．连续细胞系都获得了不死性

D．连续细胞系不一定都发生了转化

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。

回答下列问题：

(1)利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmOl/L的________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是______________蛋白质。

(2)通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤 膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____(填“选择”或“鉴别”)培养基，蛋白胨的作用有_____(答出两点即可）。

②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是______。

③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应 _______(填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是___。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。

回答下列问题：

(1)利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的_____到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_____。

(2)通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红-美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____ (填“选择”或“鉴别”)培养基，蛋白胨的作用有_____ (答出两点即可）。

②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是_____。

③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应 _____ (填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是________。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7．0、浓度为20mmol/L的_______________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_______蛋白质。

（2）装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是____________________________。

（3）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用_______________。

②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和_____________。

③某研究小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_____；

④滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是______。

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大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：

（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的___________ 到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_____蛋白质。

（2）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用有 _________。

②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和高压蒸汽灭菌。配制伊红-美蓝培养基时，乳糖需要单独在压力为70kPa，温度为115℃灭菌20min，原因是__________。接种前通常需要检测固体培养基是否灭菌合格，检测方法是___________。

③滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_______________。

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［生物—选修1：生物技术实践］（15分）大肠杆菌是人和许多动物肠道中的主要细菌，若水中大肠杆菌超标，说明水源可能被粪便污染。伊红美蓝培养基可用于检测水中大肠杆菌的数量。回答下列问题：

（1）伊红美蓝培养基含有大肠杆菌生长繁殖必须的　 　　 　 四类营养物质，大肠杆菌的代谢产物会和伊红、美蓝发生反应，使菌落呈现　 　　 　 色。伊红美蓝培养基属于 　　 　　 （填“选择”或“鉴别”）培养基。

（2）某水样的大肠杆菌严重超标，需采用稀释涂布平板法统计样品中活菌数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的　　 。一般选择菌落数在　 　　 　 的平板进行计数，这样统计的菌落数　 　　 　 （填“大于”、“等于”或“小于”）活菌的实际数目。

（3）用大剂量紫外线照射大肠杆菌，获得了变异菌株，这种变异来源于　 　　 　 。利用平板划线法对该变异菌株进行纯化，在第二次以及其后的划线操作时，菌体来自　 　　 　 。

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