木聚糖酶能将木聚糖最终降解为木二糖、木三糖等聚合度低的低聚木糖。为探究木聚糖酶降解蔗渣木聚...

木聚糖酶能将木聚糖最终降解为木二糖、木三糖等聚合度低的低聚木糖。为探究木聚糖酶降解蔗渣木聚糖的最优温度和pH组合，科学家在下表所示的不同因素水平组合下，在蔗渣木聚糖粗提液中加人2%木聚糖酶，分别酶解6h，在酶解完全后离心取上清液检测低聚木糖得率及平均聚合度。下列说法不正确的是（　　 ）

酶水解因素水平设计表

A.通过进行25组温度和pH组合实验可以准确测定木聚糖酶的最适温度和最适pH

B.每个组合重复操作3次实验取均值，目的是排除偶然因素对实验结果造成干扰

C.低聚木糖得率越高、平均聚合度越低的组合是木聚糖酶降解蔗渣木聚糖的最优组合

D.酶添加量2%和酶解时间6h属于实验的无关变量

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回答下列（一）、（二）小题：

（一）镉是工业废水中常见的污染物，对人休的伤害极大，我国环保法列为一类污染物。一些微牛物可以分泌多聚糖，糖蛋白，脂多糖，可溶性氨基酸等胞外聚介物质，这些聚合物具有络合或沉淀金属离子，从而起到净化工业废水中重金属盐的功能。某同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选镉降解高效菌株。请回答下列问题：

（1）_________是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。

（2）镉降解菌富集培养基含有蛋白胨、镉、葡萄糖、水等物质，则其在进行灭菌时应控制压力在______。分离时应取不同浓度的稀释液_________ml涂也到平板上。

（3）下图为平板划线法分离纯化细菌，整个实验过程需要将接种环灼烧灭菌_____________次。

A.2　　　　 B.3　　　　 C.4　　　 D.5

（4）采用光电比色测定法检测降解后的废水中镉留量。在制备标准曲线实验过程，下表中1〜5号比色管的镉浓度应分别为_________。

最后分别以_________为横、纵坐标绘制曲线。

（二）生物技术己经渗入到了我们生活的方方面面。请回答下列有关动物细胞培养的相关问题：

（1）动物细胞培养的原理是_________，需要将培养瓶放入_________培养。

（2）培养过程中需要用胰蛋白酶消化组织中的_________。

（3）传代培养得到的细朐系往往具有_________核型。关于细胞系和细胞株下列说法错误的是（___）

A.原代培养得到的细胞也可以是细胞系

B.细胞株是特殊的细胞系

C.连续细胞系都获得了不死性

D.连续细胞系不一定都发生了转化

（4）细胞克隆又称为克隆培养法，它的最主要用途之一就是从普通细胞系中分离出_________突变会田胞系。

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绿脓杆菌利用一种独特的分泌系统——6型分泌系统，将有毒的蛋白传递给竞争细菌；随后，有毒蛋白开始分解对手中名为肽聚糖的结构蛋白；最终，竞争细菌的防御性细胞壁出现崩溃，从而被绿脓杆菌所击败。下列叙述正确的是（　　 ）

A.通常情况下，T2噬菌体不会寄生在绿脓杆菌体内

B.绿脓杆菌的DNA分子中碱基对的增添、缺失或替换一定引发基因突变

C.有毒蛋白基因在转录时，RNA聚合酶的结合位点在RNA上

D.有毒蛋白属于分泌蛋白，是由附着于内质网上的核糖体合成

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美国科学家发现，绿脓杆菌利用独特的分泌系统将毒蛋白传递给附近的其他细菌，分解其他细菌中名为肽聚糖的结构蛋白，其他细菌的细胞壁出现崩溃，从而被绿脓杆菌所击败。据所学知识，以下说法正确的是 (      )

A．绿脓杆菌与绿色植物细胞的结构区别主要是有无细胞壁

B．绿脓杆菌能分泌毒蛋白，说明其具有内质网、高尔基体等细胞器

C. 绿脓杆菌生命活动所需能量由线粒体产生供给

D．绿脓杆菌与其他细菌的关系为竞争

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木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木聚糖酶,在食品工业上具有较高的潜在应用价值。

现欲从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，并从中筛选木聚糖酶高产菌株，获得耐热木聚糖酶。回答下列问题：

（1）取适量体积的样品涂布在富含_____的固体培养基上,置于65℃(原因是此温度是______）的培养箱中培养，菌落长出后，挑取单个菌落在培养基上用_____法接种培养，进行菌株的______。将得到的菌株接种到______（固体/液体）培养基中富集。

（2）将富集后的菌株接种于固体培养基上,待菌落长出后用0.1%的_______染色1h，再用lmol/L　 NaCl脱色。菌落周围会出现______，筛选_____的菌落即为木聚糖酶高产菌株。

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木聚糖酶系可以将半纤维素（一种多糖）转化为单细胞蛋白和其他有用物质。有些嗜热菌能产生耐热木聚糖酶，在食品工业上具有较高的潜在应用价值。现欲从温泉中分离能分解半纤维素的嗜热菌，并从中筛选木聚糖酶高产菌株，获得耐热木聚糖酶。回答下列问题：

（1）实验中，接种环使用前后都在酒精灯上灼烧，其目的是______________________________。

（2）取适量体积的样品涂布在富含__________且其为唯一碳源的固体培养基上，置于恒温培养箱中培养，菌落长出后，挑取单个菌落并进行一系列操作，然后在培养基上用__________法接种培养，进行菌株的__________。最后将得到的菌株接种到__________（填“固体”或“液体”）培养基中富集。

（3）将富集后的菌株接种于固体培养基上，待菌落长出后用0.1%的__________染色1h，再用1mol/LNaCl脱色。菌落周围会出现__________，筛选__________的菌落即为木聚糖酶高产菌株。

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某实验小组研究了不同金属离子对β -葡聚糖酶活性的影响（其他条件相同且适宜），下表为添加一定量化合物后，β-葡聚糖酶活性的变化情况。下列相关分析正确的是（　　 ）

注：忽略Cl-对酶活性的影响

A.实验中Na+、Cu2+、Mn2+、Fe3+均对β-葡聚糖酶具有显著激活作用

B.Cu2+可能通过改变该酶空问结构抑制其降低化学反应活化能的能力

C.若分别增加Mg2+和Ca2+的浓度，则它们对酶的激活作用也将会增强

D.KI和KH2PO4中酶活性不同是因I-抑制了K+对酶活性的促进作用

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β-甘露聚糖酶能分解甘露聚糖，在食品、医药等方面有着广泛的应用，从土壤中筛选能产生该酶的枯草芽孢杆菌。请回答下面问题：

（1）用于培养微生物的培养基，除了提供微生物生长必需的营养物质之外，还需要满足微生物对________（至少答两点）的要求。

（2）在污水沟、死树桩旁采集土样，在纯化培养该菌之前，一般会进行选择培养，其目的是__________。

（3）经梯度稀释后获得的菌液一般用______________________法将其接种于选择培养基上，配制该选择培养基的步骤是_________________________________________________。

（4）已知枯草芽孢杆菌在含有甘露聚糖的培养基生长，经染色剂染色后，在平板上会形成无色透明圈。实验人员欲利用选择培养基筛选出高产β-甘露聚糖酶的枯草芽孢杆菌，请写出实验思路_____________________。

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豆科植物细胞壁中含有大量不能被猪消化的甘露聚糖。研究人员通过基因工程等技术培育出转甘露聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图，图中PSP为猪唾液腺分泌蛋白基因启动子，neo为新霉素抗性基因。请回答下列问题：

（1）PCR过程中，温度降低到55℃的目的是_______________________________。

（2）步骤②中选择将manA基因插入PSP后面的目的是___________________。

（3）进行早期胚胎培养时，通常将其置于通入混合气体的培养箱中培养，其中CO2的主要作用是____________________；另外，需定期更换培养液，目的是___________________。

（4）步骤⑥中，通常选择发育到______________阶段的胚胎成功率较高。

（5）与饲养普通猪相比，饲养转基因猪的优势是____________________________。

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植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含有半乳 糖醛酸的多聚糖）等。研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下 图（neo 为新霉素抗性基因）。

（1）将该重组质粒成功导入受体细胞后，经培养，发现约有 50%的细胞能正常表达目的基因产物，原因 是_____________________________________________________________。通过①过程获得的重组质粒含有 4.9 kb 个碱基对，其中 manA 基因含有 1.8 kb 个碱基对。若用 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得 1.7 kb 和 3.2 kb 两种 DNA 片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得__________kb 长度两种的 DNA 片段。

（2）图 2 中，猪胎儿成纤维细胞一般选择传代培养 10 代以内的细胞，原因是__________________________________，猪 的卵母细胞一般要培养到__________期。

（3）在④过程的早期胚胎培养时，通常需要定期更换培养液，目的是______________________________________________，一 般培养到__________阶段，可向受体移植。

（4）⑤过程前，通常需对受体母猪注射孕激素，对其进行__________处理。

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