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酿酒酵母普遍应用于白酒、红酒、啤酒和果汁饮料的生产，其生物合成过程会形成多种多样的代谢产物，从而对食品风味产生重要影响。以下是从酒曲样品中分离出酵母菌的过程：
处理酒曲样品→过滤→系列稀释至10-2—10-7→选择适宜稀释度→涂布固体培养基→28℃下培养48h→挑取典型菌落→镜检→菌种鉴定→菌种保藏。请回答下列有关问题：
（1）制备固体培养基时，采用___________法灭菌15min~20min。
（2）通过稀释涂布平板法可以统计样品中活菌的数目。为保证结果准确，一般选择的稀释浓度要保证涂布后在培养基表面形成___________。涂布平板操作时应在___________附近进行。
（3）菌种鉴定后要进行菌种保藏，具体方法是：将菌种接种于固体斜面培养基上，28℃培养后，将试管于4℃的冰箱保存。这种方法保存的时间不长，菌种容易___________。若想长期保藏，可以采用___________的方法，放在___________的冷冻箱中保存。
（4）酵母菌常用于制作葡萄酒，酒精发酵时一般将温度控制在___________，常用___________检测发酵后是否有酒精产生。
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阅读下列材料，回答下列小题。
甜瓣子是豆瓣酱的重要成分，风味受蚕豆蛋白分解产生的氨基酸影响，也受发酵过程中不同微生物的多种代谢产物影响。其生产工艺如下图所示。
某研究团队对加盐水后的发酵阶段的传统工艺（盐度15%，温度37 ℃，发酵30天）进行了改良，改良后甜瓣子风味得以提升。新工艺参数如下表所示。
时期
时段（天）
盐度（%）
温度（℃）
前期
0~12
6
12
中期
12~16
6
37
后期
16~30
15
37
两种工艺的结果比较见下图。
1.下列关于本研究的实验方法与原理的描述，错误的是（ ）
A.发酵开始阶段的微生物主要来源于制曲过程的积累
B.蚕豆瓣可提供微生物生长繁殖所需的碳源和氮源
C.温度与盐度都影响微生物的生长繁殖
D.定期取样，使用平板划线法统计活细菌总数
2.下列对实验结果的分析，错误的是（ ）
A.新工艺中期活霉菌总数下降由温度升高导致
B.新工艺后期活细菌总数下降由温度、盐度均升高导致
C.新工艺中期氨基酸产生速率较前期末加快，是因为温度升高提高了蛋白酶活性
D.新工艺中甜瓣子风味提升，与前、中期活微生物总数高和氨基酸终产量高均有关
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（8分）【生物一一生物技术实践】
啤酒是我们日常生活中最常见的饮料之一。在啤酒生产过程中，发酵是重要环节。生产过程大致如F：将经过灭菌的麦芽汁充氧，接入啤酒酵母菌菌种后输入发酵罐。初期，酵母菌迅速繁殖，糖度下降，酒精浓度渐渐上升，泡沫不断增多。当糖度下降到一定程度后，结束发酵。最后分别输出有形物质和啤酒。根据上述过程，回答以下问题：
（1）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意______________，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。
步骤4：根据是否能在 E生长筛/，马突变菌。
（2）酿酒过程中，经检测活菌数量适宜但却不产生酒精，应采取的措施是________.
（3）小麦脱粒以后还有大量的麦秆，其成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是其________。
（4）突变菌往t斟仔有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物的作用是________，加入DNA聚合酶的作用是________。
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果胶酶是应用于果酒生产的重要酶制剂之一，它广泛存在于细菌、酵母菌等多种微生物细胞中。某枯草杆菌含果胶酯酶基因，某酿酒酵母中含有多聚半乳糖醛酸酶基因。研究者利用基因工程技术实现了果胶酯酶基因在酿酒酵母中表达，克服了细菌作为外源基因表达系统的缺点，并且使多种有利特性集中在同一菌株，过程如图。回答下列问题。
（1）细菌因繁殖快、细胞内存在易于分离的质粒等优点，最早用于外源蛋白的生产“工厂”，其缺点是没有___________（填细胞器名称），因而不具有对蛋白质加工修饰的功能。
（2）①过程获得的目的基因是___________。该基因除了利用PCR技术进行扩增外，还可以从基因文库中获取。基因文库包括基因组文库和cDNA文库，其中_____________含有某种生物的全部基因，且具有内含子。
（3）②过程重组表达载体除了含有目的基因外，还必须有启动子、_____________和 _____________等。启动子是_____________识别和结合的部位，有了它才能驱动DNA转录出mRNA，最终获得目的蛋白质。
（4）现利用目的基因制成放射性探针，如何利用此探针检测目的基因是否成功导入酿酒酵母?____________________________________________。
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啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答：
（1）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入___，发酵生产 转基因酵母乙肝疫苗。在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，共有 __（A．1 个 B．2 个 C．3个D．4 个）粘性末端。将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选，这是因为___。该转基因技术实践应用的成功标志是 __。
（2）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用。人们将经过基因改造的胚胎干细胞核与 __融合，得到___，并促使其在体外分裂发育成 __，再通过胚胎移植获得后代。目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法，其原因是 __。
（3）胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值。在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为 __，其作用是 __。
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红茶菌饮料是利用红茶菌发酵而来的一种具有抗癌防癌保健作用的活菌饮料。红茶菌包括酵母菌﹑醋酸杆菌和乳酸菌三种微生物，三种微生物互相利用其代谢产物，形成共生体。
（1）工业生产红茶菌饮料，首先需要对红茶菌进行扩大培养，所需培养基一般为____________（固体、液体）培养基。该培养基必须含有微生物生长所需要的____________、____________、生长因子、水和无机盐等基本营养成分。培养基原料称重溶解后，常用的灭菌方法是____________。扩大培养后，可采用____________的方法进行计数。
（2）红茶菌饮料产生过程中，乳酸菌在原料的____________（上、中、下层）生长，原因是____________，酵母菌代谢产生酒精和CO2，其产生酒精的场所是____________。
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酶是细胞代谢重要的催化剂，能够催化多种反应的进行，并在我们的生活中有着相当广泛的应用。在果汁制作过程中，加入果胶酶能够提高果汁产量，使果汁变得清亮。分析甲乙丙三条曲线，回答下列问题。
（1）加入果胶酶后果汁变得清亮的原因是，酶破坏了果肉细胞的。
（2）酶是活细胞产生的具有催化作用的有机物，绝大多数酶的基本单位是________。
（3）若采用传统方法在高温条件下分解细胞中的大分子，会破坏果汁中的营养成分，然而加入酶后，反应可以在较低温度下进行，这是因为酶能________。
（4）甲图表示在适宜条件下果胶酶作用于一定量的果肉细胞，反应一段时间后曲线不再上升，逐渐趋于平缓，这是由于________。
（5）乙图表示在PH适宜条件下反应速度才能达到最大，PH过高或者过低都会破坏果胶酶的________从而导致果胶酶变性失活。
（6）丙图曲线后期变成水平，这最可能是由于________。
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[生物技术实践——选修l]（15分）酵母菌是酿酒和食品生产等多个领域中不可或缺的一种微生物，与人们的生产和生活密切相关，请回答下列问题：
Ⅰ.利用酵母菌发酵生产酒精的原理是 （写反应式），该过程中，影响酵母菌酒精发酵的主要因素有___ ___。
Ⅱ.橘子果实含有芳香油，通常可用 作为材料提取芳香油，而且提取时往往选用新鲜的材料，理由是 。
Ⅲ．胡萝卜因含多种营养成分备受人们青睐。请回答下列有关问题：
（1）胡萝卜组织培养的MS培养基与微生物培养基的主要区别是：
① ，②前者一般还含有植物激素。
（2）为了更容易榨取胡萝卜汁，提高澄清度，需要加入 酶。从该酶的高产微生物的发酵液提取此酶时，样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、所带电荷的性质和数量情况如下图所示，常用 法将它们进行分离，其中移动速度最慢的分子是 。
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下列是生物学发展史上的几个重要实验，实验中没有应用放射性同位素示踪技术的是
A．弄清DNA分子的复制方式
B．探知细胞内合成分泌蛋白所经的途径
C．巴斯德发现酿酒中的发酵是由于酵母细胞的存在
D．验证光合作用释放的氧全部来自水
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十九世纪中期，法国科学家巴斯德证明食品发酵是由于微生物的作用。如今，形形色色的发酵食品在食品业中占有重要的地位。回答下列与微生物发酵、培养相关的问题：
（1）苹果酒清香、明快，风味清爽，它是由果汁发酵产生的。果汁发酵后是否有酒精产生，可用______________ 来检验。
（2）严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，这直接关系到是否能得到质量高、产量多的理想产物， 通常所指的发酵条件不包括 。
A．温度控制 B．溶氧控制 C．pH控制 D．酶的控制
（3）苹果酒在 的作用下，经过深层发酵可形成苹果醋；在此过程中要适时向发酵液中充气，原因是 。
（4）腐乳是用豆腐发酵制成，有多种微生物参与发酵，其中起主要作用的是 。在腐乳的制作过程中，从微生物培养的角度来看，豆腐应该属于 。
（5）在充足的碳源、氮源、无机盐和水的条件下，乳酸菌仍然不能正常生长，还需要在培养基中添加 。应用平板划线法分离乳酸菌时，从第二次划线操作起，每次总是要从上一次划线的末端开始划线，并划线数次，其原因是 。
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