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PRSV是单链RNA病毒，由蚜虫传播危害木瓜，华南农业大学通过农杆菌转化法成功培育出中国首例抗PRSV转基因木瓜。通过转基因技术培育植物抗病毒品种是目前常用的方法，请回答：
（1）基因与染色体的关系是：一条染色体上有多个基因，基因在___________________。
（2）转基因技术的核心步骤是基因表达载体的构建，该步骤必须用到的工具酶包括限制酶和_______________，基因表达载体中含有启动子和终止子，这两者是___________(填“复制”或“转录”)过程所必须的。此步骤中一般用两种___________处理，目的是防止Ti质粒或______________自身环化、防止目的基因和Ti质粒反向连接。
（3）农杆菌转化法的原理是当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的_________化合物，吸引农杆菌移向这些细胞；如果将目的基因插入到Ti质粒的_____________上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞的染色体DNA上。
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科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，Ti质粒如图所示。下列叙述，正确的是（ ）
A.农杆菌的拟核DNA与番木瓜基因发生重组
B.构建重组质粒需要限制酶和DNA聚合酶
C.含重组Ti质粒的农杆菌具有四环素抗性
D.转基因抗病番木瓜不具有卡那霉素抗性
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黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产。研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。
（1）获得CMV的RNA后，需在__________酶的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。
（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌Ti质粒的__________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。
（3）将经共同培养后的番茄外植体接种于含有卡那霉素和青霉素的选择培养基上培养一段时间，只有部分外植体生出愈伤组织。研究人员据此确定这些生出愈伤组织的外植体都已成功导入了cDNA，你认为他们做出以上判断的理由是____________________。愈伤组织经__________长出小芽后还需要转入__________诱导生根。
（4）要想确定转基因番茄已经成功表达出CMV外壳蛋白，需要进行__________实验。
（5）研究人员用强致病力的CMV分别感染转基因番茄与__________，通过对照发现转基因番茄具有较好的抗CMV能力。转基因番茄自交，子代中抗性植株与敏感植株数量之比接近3 ：1，由此可以得出的结论是____________________；___________________（答出两点）。
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黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产。研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。
（1）获得CMV的RNA后，需在___________酶的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。
（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌Ti质粒的 ___________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。
（3）将经共同培养后的番茄外植体接种于含有卡那霉素和青霉素的选择培养基上培养一段时间，只有部分外植体生出愈伤组织。研究人员确定这些生出愈伤组织的外植体都已成功导入了cDNA，愈伤组织经___________长出小芽后还需要转入生根培养基诱导生根。
（4）要想确定转基因番茄已经成功表达出CMV外壳蛋白，需要进行___________实验。
（5）研究人员用强致病力的CMV分别感染转基因番茄与___________，通过对照发现转基因番茄具有较好的抗CMV能力。转基因番茄自交，子代中抗性植株与敏感植株数量之比接近3∶1，由此可以得出的结论是___________；（答出两点）。
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黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产。研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。
（1）获得CMV的RNA后，在__________的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。
（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌的__________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。
（3）将经共同培养后的番茄外植体接种于含有卡那霉素和青霉素的选择培养基上培养一段时间，只有部分外植体生出愈伤组织。研究人员据此确定这些生出愈伤组织的外植体都已成功导入了cDNA，你认为他们做出以上判断的理由是_________________。
（4）要想确定转基因番茄已经成功表达出CMV外壳蛋白，需要进行____________实验。
（5）若要验证转基因番茄具有较好的抗CMV能力，请写出实验设计思路__________。转基因番茄自交，子代中抗性植株与敏感植株数量之比接近3 ：1，由此可以得出的结论是_________（答出两点）。
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2019 年中国科学院神经科学研究所利用 CRISPR—Cas9 基因编辑技术，成功构建了世界首例核心节律基因 BMAL1 敲除猕猴模型，并成功用基因敲除猴的体细胞通过克隆技术培育了5只克隆疾病猴，为节律紊乱相关疾病机理的研究提供了比较理想的动物模型。CRISPR—Cas9 基因编辑系统由单链向导 RNA（sgRNA）和 Cas9 蛋白组成。回答下列问题：
（1）科学家常用______法将 CRISPR—Cas9 基因编辑系统导入猕猴细胞，编辑系统利用 sgRNA 来识别靶基因 DNA，并引导 Cas9 蛋白剪切 DNA，使靶基因发生改变，实现基因敲除。sgRNA 能识别靶基因 DNA 的原因是______________________ 。
（2）在体外培养猕猴体细胞时，需要一定比例的 O2 和 CO2，故通常采用________或_________________________（填实验器材），将其置于 CO2 培养箱中进行培养。所使用的培养基属于_________________________（填“合成”或“天然”）培养基，培养基除了灭菌外，还需要通过_____________________________来保证无菌无毒环境。
（3）进行体细胞克隆选择去核卵母细胞作为受体细胞，可能原因是 _____________________ （答出两点）。
（4）克隆猴被用于人类疾病研究与治疗中所具有的突出优点是_____________________。（答出一点）
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烟草花叶病毒（TMV）是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因（CP基因）导入烟草并在转化的烟草植株中表达，使其获得对烟草花叶病毒的抗性。下图是转化烟草植株的培育流程，请回答：
（1）含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行 获得的。在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有 序列。
（2）将CP基因导入土壤农杆菌质粒的 ，其原因是 。
（3）含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养前，对烟草叶的处理要求是 。
（4）共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须 （有光或避光）。
（5）在配置诱导芽、根的培养基时，要注意在不同的培养阶段需调整 的比例。最终检测转基因是否成功，可用 方法进行检测。
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烟草花叶病毒(TMV)是一种在烟草及蔬菜等经济作物中广泛传播的病毒，对农业生产造成很大的危害。研究者利用植物基因工程的方法将烟草花叶病毒外壳蛋白基因(CP基因)导入烟草并在转化的烟草植株中表达，使其获得对烟草花叶病毒的抗性。下图是转化烟草植株的培育流程，请回答：
(1)含有CP基因的cDNA文库是通过将TMV的RNA进行 获得的。在对cDNA进行PCR扩增时，设计的引物自身不能含有 序列。
(2)将CP基因导入土壤农杆菌质粒的 ，其原因是__________________________
_________________________________________________________________ 。
(3)含重组质粒的土壤农杆菌与烟草叶共培养过程中，对烟草叶的处理要求是 ________________________________________。
(4)用含重组质粒的土壤农杆菌感染烟草叶成功后，共培养形成愈伤组织时的培养条件是必须 。
(5)在诱导芽、根的培养基中需添加 才能进行筛选，并要注意在不同的培养阶段需调整 的比例。
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我国科学家通过基因工程成功培育出转基因抗虫棉。请回答下列问题。
（1）基因工程常用质粒作为载体，是由于质粒具有 、 等特点。
（2）利用农杆菌转化法将抗虫基因导入植物细胞，构建重组Ti质粒时，需将含抗虫基因的DNA片段插入到Ti质粒DNA的 区域上。
（3）利用PCR技术扩增抗虫基因过程中，将温度加热至90-950C，然后冷却至55-600C，再加热至70-75℃的目的是
（4）农杆菌侵染植物细胞后，可以使抗虫基因插入到植物细胞中染色体的DNA上，则是否一定能表现出抗虫性状？ ，理由是
（5）可利用 技术将含有抗虫基因的植物细胞培育成抗虫植株，该技术证明了分化的植物细胞，仍然具有
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[生物——选修3：现代生物科技专题]
为了有效控制水稻害虫的危害，中国农业科学院和华中农业大学合作，成功地获得了转Bt基因的二倍体水稻。该基因来源于苏云金芽孢杆菌，基因的表达产物Bt毒蛋白具有良好的杀虫效果。请回答：
（1）若知道Bt毒蛋白的氨基酸序列，则可以推测出Bt基因的核苷酸序列，但推测出的核苷酸序列并不是唯一的，其原因是___________________________________________。在已知Bt基因的核苷酸序列之后，再通过___________方法获取目的基因。
（2）获得Bt基因后，在体外可以通过___________技术进行扩增，该技术需要的条件是___________、酶、dNTP、模板，其中的酶是___________，然后构建基因表达载体。基因表达载体中除了具目的基因、启动子和终止子之外，还需具有___________。
（3）将Bt基因导入水稻细胞中时不宜采用农杆菌转化法，最可能的原因是___________。
（4）可采用抗虫接种实验的方法，在___________水平上鉴定Bt基因在受体植株内是否成功表达。
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