三孢布拉霉菌能用来生产胡萝卜素，但该菌株的高产性状容易退化，需要定期筛选出高产菌株，研究表...

三孢布拉霉菌能用来生产胡萝卜素，但该菌株的高产性状容易退化，需要定期筛选出高产菌株，研究表明菌体细胞内的可将无色的TTC还原为红色复合物，且菌体细胞内含量越高，还原能力越强，胡萝卜素合成能力也越强．结合下列筛选菌株及提取胡萝卜素的流程图回答问题：

三孢布拉霉菌→梯度稀释→涂布到含TTC的培养基上→挑取单菌落→扩大培养→收集菌丝并处理→萃取→鉴定

（1）工业生产上提取天然胡萝卜素的方法主要有三种，除可利用上述微生物的发酵生产之外，还可以从植物中提取和从________中获取．

（2）将菌液涂布到含TTC的培养基上，目的是筛选出_______，对照组需涂布等量的_______以判断培养基是否被污染．挑取单菌落时，若菌落周围_______，则菌株合成胡萝卜的能力较强．

（3）鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常采用 ______法，该方法也可用于分离色素，其原理是 ____________________．

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霉菌能用来生产胡萝卜素，但该菌株的高产性状容易退化，需要定期筛选出高产菌株，研究表明菌体细胞内的[H]可将无色的 TTC 还原为红色复合物，且菌体细胞内[H]含量越高，还原能力越强，胡萝卜素合成能力也越强。请结合下列筛选菌株及提取胡萝卜素的流程图回答问题。

孢布拉霉菌液→梯度稀释→涂布到含有 TTC 的培养基上→挑取单菌落→扩大培养→收集菌丝并处理→萃取→鉴定

（1）工业生产上提取天然胡萝卜素的方法主要有三种，除可利用上述微生物的发酵生产之外，还可以从植物中提取和从_________中获取。萃取的效率主要取决于萃取剂的_________。萃取的最佳温度和时间可以通过设置___________来摸索。

（2）将菌液涂布到含 TTC 的培养基上，目的是筛选出______________________，对照组需涂布等量的___________以判断培养基是否被污染。挑取单菌落时，若菌落周围___________，则菌株合成胡萝卜素的能力较强。

（3）从该微生物中提取胡萝卜素时，扩大培养后要收集菌丝进行的处理是粉碎和____________，以提高萃取效率。现有石油醚、乙酸乙酯、乙醚、苯等四种有机溶剂，最好选择____________用于胡萝卜素的萃取，主要理由是_______________________；________________（答二点以上）。

（4）胡萝卜素的萃取瓶口需安装_______________装置，以防止___________。

（5）用微生物的发酵生产，除供给足量的水、无机盐、氧气外，还需供给_______等营养物质。微生物计数有显微镜直接计数法、稀释涂布平板法二种，但二者的计数结果却存在一定的差异，原因是____________________________，若发酵液中的产胡萝卜素菌需进行及时的数量分析，最好采用___________________法进行计数。

（6）为了验证萃取物是否是胡萝卜素，该同学将叶绿素 b、叶绿素 a、叶黄素、萃取物和色素混合液（含叶绿素 b、叶绿素 a、叶黄素和胡萝卜素）依次点样在滤纸的 1、2、3、4、5 位置（如图甲所示），并进行分离，滤纸条上各色素带的位置_____________（填字母）时，即可说明该萃取物最可能是胡萝卜素。

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选修一：生钩技术实践

β-胡萝卜素是天然色素，备受消费者喜爱,为获得高产β-胡萝卜素的菌株，图甲为科研工作者利用三孢布拉霉负菌诱变选育高产菌株的过程，请回答下列问题：

（1）用紫外线照射三孢布拉霉负菌的目的是______________。根据胡萝卜素______________的特点，从胡萝卜中提取胡萝卜素常用萃取法。

（2）液体培养过程的作用是______________，过程⑥是______________。

（3）鉴定提取的胡萝卜素粗品用______________法。将萃取的胡萝卜素样品鉴定结果与β胡萝卜素标样的进行比对，结果如图乙，分析可知，色带______________为β-胡萝卜素。

（4）胡萝卜素可用于治疗因缺乏维生素A而引起的夜盲症、干皮症等疾病，由此推测，胡萝卜素可用于治疗这些疾病的原理是____________________________。

（5）β-胡萝卜素还可以从大面积养殖的______________中获取。

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利用紫外线诱变选育高产β­胡萝卜素的三孢布拉霉负菌，未突变菌不能在含有一定浓度的β­紫罗酮的培养基上生长，菌体随β­胡萝卜素含量的增加从黄色加深至橙红色。图甲为选育菌株及提取、获得β­胡萝卜素的流程，请回答下列问题：

（1）用紫外线照射三孢布拉霉负菌的目的是____________________。为选出高产突变菌株，还应在培养基中添加____________________，在接入菌种前，应对培养基进行____________________，以避免杂菌污染。

（2）某同学进行正确的接种操作，平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是__________（填“稀释涂布平板法”或“平板划线法”）；由于______________________________，所以培养基上只有少数菌能生长形成菌落。

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三孢布拉氏霉菌具有β胡萝卜素含量高、易于培养等特点而广泛用于工业化β胡萝卜素的生产。请回答下列问题。

(1)用稀释涂布平板法可以纯化三孢布拉氏霉菌，每稀释10时一般是将1mL菌液移入盛有____mL无菌水的试管中。常用___________法进行活菌计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于_________。但统计的菌落数往往_____________(填“多于”或“少于”)稀释液中的活菌数。

(2)不同的材料选用的提取方法不同，根据胡萝卜素具有___________的特点，常用____________法提取胡萝卜素，其效率主要取决______________。

(3)如图为提取的胡萝卜素样品通过纸层析进行鉴定的结果，从图中分析可知，色带 _____________为β胡萝卜素。

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木糖醇可作为甜味剂，还具有抗龋齿的特性。常被用来作为食品甜味剂或医疗上给糖尿病患者作糖的替代品。用微生物生产木糖醇副产物少且含量低，易于分离提纯。为了筛选木糖醇高产菌株，某研究小组设计了下表所示的培养基。请分析回答：

（1）按照物理性质划分，该培养基为______________培养基。若要利用该培养基获得木糖醇高产菌株的菌落，则应添加的成分是_____________。该培养基中主要的碳源和氮源分别是_____________。

（2）为了防止杂菌污染，该培养基溶化后要进行_________，常用的方法是__________。

（3）实验菌种通常从木糖厂废水、废弃的木糖液污泥中采集，说明木糖醇高产菌株主要生活在______________的环境中。

（4）为了快速获得木糖醇高产菌株，通常采用摇床培养的方法，由此说明木糖醇高产菌株的异化作用类型为__________，此外，摇床培养的优点还有________________。

（5）若要检测培养液中菌体的数量，通常将菌液用__________接种到固体平板培养基表面，根据___________估算菌液中菌体的数量。

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研究人员用X射线处理野生型青霉菌，选育出了高产青霉菌新菌株。这种育种方法属于

A. 杂交育种　　 B. 单倍体育种　　 C. 诱变育种　　 D. 多倍体育种

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三孢布拉式霉菌是一种可产生胡萝卜素的真菌，常用于胡萝卜素的工业化生产。请回答：

（1）胡萝卜素是常用的食品色素，广泛地用作食品、饮料、饲料的添加剂，除此以外，它还可以用于治疗___________________（写出一点即可）。

（2）配制三孢布拉式霉菌的培养基时，需将至PH调至__________（填“酸性”或“中性”或“微碱性”）。

（3）将发酵后的三孢布拉式霉菌处理后研磨成粉末，加入_______________（填“石油醚”或“乙醚”或“丙酮”萃取，选择该萃取剂的依据是：______________

（4）将提取的胡萝卜素粗品通过__________法进行鉴定．据下图结果可判断出样品_______中含有胡萝卜素。

（5）研究者利用聚丙烯酰氨凝胶电泳对三孢布拉氏霉菌的蛋白质进行分离．为了消除蛋白质分子原有电荷量对迁移率的影响，可在凝胶中加入_____________，原理是___________因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取于蛋白白质分子的大小。

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利用紫外线诱变选育高产β━胡萝卜素的三孢布拉霉负菌，未突变菌不能在含有浓度为10-5M的β━紫罗酮的培养基上生长。该菌是含多个细胞核的单细胞真菌，菌体随β━胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色。图甲为选育及提取获得β━胡萝卜素流程。

（1）三孢布拉霉负菌与细菌共同具有的细胞器是________。过程①的原理是________。

（2）培养基中的葡萄糖含量对菌体生长影响最大，葡萄糖为菌体生长提供________，为选出高产突变菌种，还应在培养基中添加________，该培养基按用途分是________培养基。

（3）进行③过程时，应选取________色的菌落接种至液体培养基。为筛选纯化β━胡萝卜素产量高的菌种，⑤中采取重复________过程（填过程中的数字）。

（4）某同学进行过程乙的正确操作，平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_________________；只有少数菌能生长形成菌落的原因是_____________________。

（5）稀释涂布平板法计数：若将稀释105倍的某细菌菌液，用稀释涂布平板法进行计数。在五个固体培养基上分别接种0.1ml该细菌菌液，适宜条件下培养一段时间后，培养基上的菌落数分别为：20、40、152、154、156，则每升菌液中细菌数量为________个。

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（8分，每空1分）利用紫外线诱变选育高产β-胡萝卜素的三孢布拉霉负菌（单细胞真菌），未突变菌不能在含有浓度为10-5M的β-紫罗酮的培养基上生长。菌体随β-胡萝卜素含量增加从黄色加深至橙红色。图甲为选育及提取获得β-胡萝卜素流程。

（1）三孢布拉霉负菌与细菌共同具有的细胞器是　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（2）培养基中的葡萄糖含量对菌体生长影响最大，葡萄糖为菌体生长提供　　　　　　　　 ,为选出高产突变菌种，还应在培养基中添加　　　　　　　　　　　　　　 ，该培养基按用途分属于　　　　　　　　　　 培养基。

（3）进行③过程时，应选取　　　　　 色的菌落接种至液体培养基。为筛选纯化β━胡萝卜素产量高的菌种，⑤中采取重复　　　　　　　　 过程（填过程中的数字）。

（4）某同学进行正确的接种操作后，平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是　　　　　 。用这种方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目　　　　　　 。

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