近年来，科学家利用基因工程技术创造出许多优良品种或产品。下图为获得抗除草剂转基因玉米的技术...

近年来，科学家利用基因工程技术创造出许多优良品种或产品。下图为获得抗除草剂转基因玉米的技术路线，其中含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。请回答以下问题：

（1）获得抗除草剂转基因玉米的过程中核心步骤是______________。

（2）为防止酶切产物自身环化，需使用______________种限制酶，分别对含除草剂抗性基因G的DNA片段和Ti-质粒上的_______________（填“报告基因”、“T-DNA”、“氨苄青霉素抗性基因”）进行酶切。

（3）为提高转化成功率，常用含______________的溶液处理土壤农杆菌，使其成为感受态细胞。转化成功的农杆菌应在含_________________的培养基上进行筛选1。

（4）农杆菌细胞内“报告基因”表达后______________（填“能”或“不能”）能催化无色物质K呈现蓝色，原因是_____________________________。

（5）农杆菌转化愈伤组织的过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。所以进行过程筛选2时，应在培养基中加入____，并挑选_______________的植物细胞，进行______________获得抗除草剂转基因玉米幼苗。

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下图是培育抗除草剂玉米的技术路线图，含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，会导致未转化的愈伤组织可能在含除草剂的培养基中生长。下列相关叙述不正确的是（ ）

A. 过程①用两种限制酶就可防止酶切产物自身环化

B. 过程②用Na+处理可提高转化成功率

C. 过程③应在培养基中加入除草剂和物质K

D. 筛选得到的A是无农杆菌附着的转化愈伤组织

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玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性状，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤Ⅰ、Ⅱ试验。

Ⅰ、获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如图。

（1）为防止酶切产物____________________，构建基因表达载体需用2种限制酶。

（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是__________，自交系__________的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。

（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含____________________的选择培养基。

（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化的愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是____________________和_________________________。

（5）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占__________。继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合自交系A。

Ⅱ．通过回交使自交系B获得抗除草剂性状

（6）抗除草剂自交系A（GG）与自交系B杂交产生F1，然后进行多轮回交（下图）。自交系B作为亲本多次回交的目的是使后代积累越来越多______________________。

（7）假设子代生活力一致，上图育种过程H3代中含G基因植株的比例是__________，若回交后每代不进行鉴定筛选，直接回交，H3代中含G基因植株的比例是__________。

（8）下表是鉴定含G基因植株的4种方法。请预测同一后代群体中，4种方法检出的含G基因植株的比例最小的是__________。

（9）利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

①第__________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

②在PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为____________________________。

（10）对Hn继续筛选，最终选育出高产、抗病、抗除草剂等优良性状的玉米自交系。

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玉米自交系（遗传稳定的育种材料）B具有高产、抗病等优良性质，但难以直接培育成转基因植株，为使其获得抗除草剂性状，需依次进行步骤I、II试验。

Ⅰ．获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。

（1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是____（单选）。

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A．①③　　　　　　　 B．①④　　　　　 C．②③　　　　 D．②④

（2）下表是4种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是____________，自交系__________的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。

（3）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织，需使用含_____________________的选择培养基。

（4）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是_______________（多选）。

A．无农杆菌附着的未转化愈伤组织　　

B．无农杆菌附着的转化愈伤组织

C．农杆菌附着的未转化愈伤组织　　　

D．农杆菌附着的转化愈伤组织

（5）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占_____________。继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合自交系A。

（6）下表是鉴定含G基因植株的4种方法。请预测同一后代群体中，4种方法检出的含G基因植株的比例，从小到大依次是_____________________________________。

II．通过回交使自交系B获得抗除草剂性状

（7）抗除草剂自交系A（GG）与自交系B杂交产生F1，然后进行多轮回交（下图）。自交系B作为亲本多次回交的目的是使后代______________。

对Hn继续筛选，最终选育出高产、抗病、抗除草剂等优良性状的玉米自交系。

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黑麦草具有抗除草剂草甘膦的能力，是因为黑麦草拥有编码抗草甘膦酶的基因。科学家利用该基因．通过转基因技术获得了抗除草剂草甘膦的玉米新品种。培育新品种过程中用到了PCR技术（如图所示），请回答下列问题:

（1）通过反转录法得到_______________文库，它属于部分基因文库，可从中选取抗草甘膦酶的基因。

（2）体外获得大量编码抗草甘膦酶的基因要利用PCR技术，该技术所依据的原理为_________，图中物质A是__________，B酶是__________。

（3）将目的基因导入植物细胞有多种方法，最常用的是_______________。

（4）若需要对转入抗草甘膦基因的玉米进行个体生物学水平的鉴定，需要对玉米_____。

（5）若实验结果不理想，为了提高抗草甘膦酶活性，可以通过___________工程设计和改造编码抗草甘膦酶的基因。

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下图为获得抗除草剂转基因玉米的技术路线，请回答：

（1）构建表达载体选择限制性核酸内切酶时，要求Ti质粒内每种限制性核酸内切酶只有一个切割位点，同时要求酶切后，G基因形成的两个粘性末端序列不相同，这个过程需用______种限制酶，目的是___________。除草剂抗性基因G和Ti质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是________________________

（2）农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带_______________插入受体细胞的核DNA。若核DNA中仅插入一个G基因，自交后代含G基因的植株中，纯合子占________________。

（3）获得抗除草剂转基因玉米涉及到多次筛选，其中筛选含重组质粒的农杆菌应使用含_______________的选择培养基，使用含_______________的选择培养基筛选出转化的愈伤组织，再诱导愈伤组织再生出抗除草剂转基因玉米。

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玉米A具有高产、抗病等优良性状，为使其获得抗除草剂性状，操作流程如下图，其中人为整合上去的报告基因可在筛选检测目的基因是否导入起作用。回答下列有关问题。

（1）通过______________或______________法可以扩増抗除草剂基因G。

（2）Ti质粒上的报告基因在农杆菌内不能获得相应的蛋白质产物，在受体植物细胞中则可以，可能的原因是__________________________________________。步骤①中为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则______________________。

①质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

③G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

④酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

A．①③　　　　 B．①④　　　　 C．②③　　　　 D．②④

（3）农杆菌感染愈伤组织时，T－DNA携带的G基因易转移到受体细胞______________上，然后除尽农杆菌，再使用含_____________________的培养基得到植株B。整个过程中影响玉米愈伤组织能否成功再生植株的原因除了环境因素和培养基的成分之外，还可能有_______________________________________________________（答出两点即可）。

（4）植物根瘤磨碎后，为使农杆菌的分离效果更好，采用______________法。若某一实验组平板上茵落平均数为38个／平板，而空白对照组的一个平板上出现了8个菌落，这种结果说明在此次分离出现了______________现象。若将30（即38－8）个／平板作为本组菌落数的平均值，该该做法_______（填“正确”或“不正确”）。

（5）上图操作流程的玉米幼胚到植株B的过程中，不同培养基的区别主要在于植物生长调节剂的浓度不同，过程④⑤分别选择______________、______________（填下表中的培养基类型甲或乙），写出表中“……＂处的信息____________________________。

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获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A.①③ B.①④

C.②③ D.②④

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获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如下图。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是

①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同

A. ①③　　 B. ①④

C. ②③　　 D. ②④

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下图为利用体细胞诱变育种技术获得抗除草剂白三叶草新品种的过程，下列叙述错误的是(　　　 )

A．该育种过程所依据的原理有基因突变和植物细胞具有全能性

B．过程①和②所涉及的培养基中，不同植物生长调节剂的浓度比例不同

C．白三叶草愈伤组织和胚状体的细胞中DNA和RNA种类相同

D．过程③通常采用的筛选方法是向白三叶草幼苗喷洒除草剂

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