基因和表达载体相连时既可以正向连接也可以反向连接。下图甲、乙分别表示某质粒、含目的基因和酶...

基因和表达载体相连时既可以正向连接也可以反向连接。下图甲、乙分别表示某质粒、含目的基因和酶切位点的DNA片段，构建基因表达载体时应用酶B和酶C进行切割，不应用酶A切割运载体和DNA片段，其原因不包括（　　 ）

A.防止目的基因和运载体发生反向连接 B.保证构建的重组质粒中含有标记基因

C.防止目的基因或运载体重新自身环化 D.保证构建的重组质粒中含有启动子

高二生物单选题简单题查看答案及解析

已知限制酶BamH Ⅰ、Bcl Ⅰ、Sau3A I、HindⅢ识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓ GATCA、↓GATC、 A↓ AGCTT。图1，图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

（1）基因工程中目的基因的来源除了用人工的方法合成，还可以从____________________________________中分离出来。

（2）基因工程常用载体除质粒外，还有___________________________和_____________________________。

（3）用图中质粒和目的基因构建重组质粒时，若只能选择一种限制酶，则应选用_________来切割。为避免目的基因反向插入带来的不正常表达，应选用两种限制酶____________________________（填酶的名称）切割质粒，选用Sau3A I、HindⅢ切割含目的基因的DNA片段。然后用从大肠杆菌中分离得到的____________________________连接构成重组质粒。

（4）由于Taq酶是从引物的3'端开始延伸DNA链，所以PCR过程中，可以从图2中的A、B、C、D四种单链DNA片段中选取_________作为引物。

高二生物综合题中等难度题查看答案及解析

基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：

（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。

（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5′→3′，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。

（3）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经____________处理过的_____________态的大肠杆菌中。

高二生物综合题中等难度题查看答案及解析

基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：

（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。

（2）已知DNA复制子链的延伸方向是5′→3′，图3中的A、B、C、D在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。

（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段。

（4）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用____________________两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过______________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经____________处理过的_____________态的大肠杆菌中。

高二生物非选择题困难题查看答案及解析

下表是几种限制酶识别序例及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用的限制酶是__________，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入经__________处理的处于__________态的大肠杆菌。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________。要检测目的基因是否在受体细胞中表达，应采用__________方法。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bc1 I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为__________，对于该部位，这两种酶__________（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

高二生物综合题中等难度题查看答案及解析

屠呦呦因发现青蒿素治疗疟疾的新疗法而获得诺贝尔奖。寄生于人体细胞内的疟原虫是疟疾的病原体。科学家通过紫外线处理大量青蒿幼苗后，偶然发现一株高产高效植株，进行基因测序发现该植株控制青蒿素合成相关的一种关键酶的基因发生了突变。

（1）如果用高产青蒿关键酶基因的mRNA反转录产生的cDNA片段与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群叫做青蒿的__________；获得的cDNA与青蒿细胞中该基因碱基序列__________（填“相同”或“不同”）。

（2）将获得的突变基因导入普通青蒿之前，先构建基因表达载体，图1、2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答：

用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒时不能使用SmaⅠ切割，原因是__________。构建重组质粒时在其目的基因前需要添加特定的启动子和终止子，启动子的作用是______________________。终止子的化学本质是一段有特殊结构的___________。

（3）基因表达载体导入组织细胞后，要通过__________技术培育出转基因青蒿幼苗，鉴定该基因工程是否成功还要进行____________实验，但是不能直接在培养基上培养疟原虫观察，其原因是______________。

高二生物综合题中等难度题查看答案及解析

径柳匙叶草是一种泌盐植物。科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na＋/K＋逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片断，Sau3A I、EcoR I、BamH I为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。请分析回答问题：

（1）若图1所示DNA片段是利用径柳匙叶草的DNA直接获得的，则该获取目的基因的方法为_________。

（2）不能在径柳匙叶草根尖分生区细胞中获得TaNHX2基因的mRNA，其原因是_________。

（3）若用BamH I切割图1所示的DNA片段，获得目的基因，则需选用_________切割图3所示质粒，以便构建基因表达载体，该方案的缺陷是_________。故切割图1所示DNA片段的最佳方案是选用_________酶。

（4）用上述最佳方案构建基因表达载体，所得重组质粒_________ （选填“能”“不能”或“不一定能”）被BamH Ⅰ切割。

（5）为了检测技术成果，科研工作者在个体水平的检测方法是_________。

高二生物综合题中等难度题查看答案及解析

在基因工程的操作中，为了防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是　　

①质粒内，每种限制酶只有一个切割位点

②目的基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点

③酶切后，目的基因形成的两个黏性末端序列不相同

④酶切后，质粒形成的两个黏性末端序列相同

A. ①③ B. ①④ C. ②③ D. ②④

高二生物单选题中等难度题查看答案及解析

图甲、乙中的箭头表示三种限制性核酸内切酶的酶切位点，ampr表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列错误的是（　　 ）

A.在构建重组质粒时，可用PstⅠ和HindⅢ切割质粒和外源DNA

B.在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因

C.图甲中的质粒用BamHⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团

D.导入表达载体的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长

高二生物单选题中等难度题查看答案及解析

荧光蛋白（GFP）在紫外光下会发出绿色荧光，某科研团队将GFP基因插入质粒P中构建了重组质粒载体P0，用于基因工程中基因表达载体（P1）的筛选和鉴定。部分过程如下图所示，下表为部分限制酶的识别序列及切割位点。请分析回答问题：

（1）过程①中，用EcoRV酶切割目的基因获得_________末端。

（2）过程②是利用_________技术，多次循环扩增DNA片段，经酶切产生带黏性末端的目的基因。该过程设计的引物5＇端序列必须是_________，以获得相应的黏性末端，便于P1的构建和筛选。

（3）过程③中，质粒P0需用限制酶_________切割，才能与目的基因在_________酶的作用下形成P1。

（4）为了筛选出含有质粒P1的菌落，需采用添加__________的培养基进行培养，在紫外光激发下_________（选填“发出”或“不发出”）绿色荧光的菌落，即为含有P1的菌落。

高二生物综合题中等难度题查看答案及解析