研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的，如将大肠杆菌得到的三酯磷酸酶固定到尼龙膜上...

研究认为，用固定化酶技术处理污染物是很有前途的，如将大肠杆菌得到的三酯磷酸酶固定到尼龙膜上制成制剂，可用于降解残留在土壤中的有机磷农药，与微生物降解相比，其作用不需要适宜的（　 ）

A．温度　　　　 B．酸碱度　　　　 C．水分　　　 D．营养

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由南京农业大学的李顺鹏教授领导的团队经过多年研究，首创了农药残留微生物降解技术，其原理是通过筛选高效农药残留降解菌株，来清除土壤、水体、农产品中的有机污染物，解决了物理、化学处理修复难度大，成本高及二次污染的问题，其中有机磷降解菌专一降解甲基对硫磷(一种含氮有机农药)，并依赖降解产物生存，且降解效果达100%，目前使用该项技术生产的无公害大米经中国绿色食品测试中心检测，无农药残留达到出口标准，获得绿色食品证书。下图是研究人员筛选有机磷降解菌的主要步骤，请分析回答问题：

(1)培养过程中需振荡培养，由此推测该“目的菌”的细胞进行的细胞呼吸方式为　　 型。在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以　　　 为氮源的固体培养基上。

(2)对培养基选用的灭菌方法一般是　　　　　　　　　　 。

(3)筛选出的纯净的有机磷降解菌菌种，需要长期保存，最好采用　　 的方法。

(4)如果该种细菌在蛋白质合成过程中，携带天冬氨酸RNA为CUG，则转录成该天冬氨酸密码子的基因的碱基组成为　　　 。

(5)研究人员在筛选有机磷降解菌时，发酵液不慎发生污染，菌群几乎全部死亡，但却侥幸的从中获得了少数可抵抗污染的新菌种，细菌这种新性状的产生来自于　　　　　　 。

(6)为了得到单个菌落，比较简便的接种方法是　　　　 ，但该方法不宜对菌落计数，而利于对菌落计数的方法是　　　　　　 。

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关于酶工程的叙述，正确的是（ 　 　　 ）

A．酶的分离提纯要依次经过过滤、层析、沉淀、提纯等步骤

B．利用枯草杆菌生产的α-淀粉酶可用于降解水体中的某些污染物

C．加酶洗衣粉能提高去污能力是因为运用了酶的固定化技术

D．尿糖试纸中含有葡萄糖羧化酶和过氧化氢酶

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阿特拉津(简称AT)是一种广泛使用的除草剂，因为溶解性好、迁移率高、残留期长，容易引起土壤污染，进而对人体健康造成严重危害。分离和固定化AT降解菌可有效修复AT污染的土壤。请回答下列问题：

(1)应从 ___的土壤中取样，可以通过____培养增加AT降解菌的浓度，以确保从土壤样品中分离到所需要的AT降解菌。为了确定得到的是AT降解菌，还需要进行 __ 产AT降解酶的实验。

(2)若固定AT降解菌中的粗提取酶，不宜采用包埋法的原因是酶分子___ 。

(3)若直接固定AT降解菌，与固定化酶比较，从操作角度考虑的优点是____（答出两点）。

(4)制备具有吸附和降解功能的固定化AT降解菌制剂的方法步骤是：①制备多孔性生物碳材料并制成悬浊液。②培养AT降解菌并制成菌悬液。③悬浊液、菌悬液和包埋剂混合，再加入到某溶液中，得到凝胶珠。④清洗凝胶珠。

若用海藻酸钠做包埋剂，溶化时最好采用 ___加热的方法，③中的某溶液是指____溶液。AT降解菌制剂中具有吸附功能的是____。

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某研究团队拟从餐厨垃圾中分离具有高效降解能力的微生物，并制成菌制剂，用于餐厨垃圾高效无害化处理。设计实验如下：

步骤一：取一定量的餐厨垃圾样品，筛除大块杂质后，装入无菌袋中密封，备用。

步骤二：配制用于培养菌种的培养基，配方如下：

1.根据配方可知，该培养基属于　　　　　

A.固体培养基 B.液体培养基

C.通用培养基 D.选择培养基

步骤三：制备样品稀释液，并将不同浓度的样品稀释液涂布于平板培养基表面进行培养，48h后观察结果。

2.在涂布过程中需要用到的工具有　　　　　　

A.无菌圆纸片 B.无菌玻璃刮铲 C.酒精灯 D.接种环 E.无菌滴管

3.培养后，培养基上长出了35个菌落，通过观察菌落的____________，可初步判断是20种不同的菌种。为进一步确定菌种类型，还需从分子水平进行的检测方法是_____________。

步骤四：对20种菌种进行分离纯化。为了比较这些菌种对餐厨垃圾的降解效果，分别配制含有餐厨垃圾主要成分（淀粉、蛋白质、脂肪和纤维素）的培养基，分别用于测定各菌种对其主要成分的降解效果，并进行测定。图表示其中4种菌种（X1-X4）在淀粉培养基上的培养结果，表3为这四种菌的测定结果。

四种菌种对餐厨垃圾各成分的降解系数

备注：降解系数（D/D0）越大，降解效果越明显。

4.写出图所示的测定菌种对淀粉降解效果的实验原理：_______________。

5.根据表中数据判断，降解餐厨垃圾能力最强的菌种是______________。

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（14分）乐果是一种广泛使用且含有机磷的农药,其残毒会对土壤造成严重污染。研究表明，阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌等都对乐果有降解作用，可以用于修复由乐果造成的农田土壤污染。请分析回答下列问题：

（1）能分解乐果的阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌等基本都分布在土壤的表层，它们的代谢类型应是________，在生态系统的成分中属于　________。

（2）为比较阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌对乐果的降解效率，课外小组的同学作了如下 实验：

①配制液体培养基。配制培养基时，除加入必要的营养物质，还必须加入　________。将配好的培养基均分为甲、乙两组，进行　________。

②各取阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌的新鲜菌液lml，分别接种到上述甲、乙培养基中，适宜条件下培养48h。48h后通过检测　________，可以比较阴沟肠杆菌、枯草芽孢杆菌对乐果的降解效率。

(3)农田中长期施用乐果会使动物的种类和数量减少。若要调查某农田中华大蟾蜍的种群密度，应采用　________法。因污染太严重而废弃的农田在污染停止后将发生的群落演替，其类型属于　________。

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利用基因工程技术生产羧酸酯酶（CarE）制剂，用于降解某种农药的残留，基本流程如图。下列叙述正确的是（　　 ）

A.过程①的反应体系中需要加入逆转录酶和核糖核苷酸

B.过程②需使用限制酶和 DNA 聚合酶，是基因工程的核心步骤

C.过程③需要使用 NaCl 溶液制备感受态的大肠杆菌细胞

D.过程④可利用 DNA 分子杂交技术鉴定 CarE 基因是否成功导入受体细胞

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利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂，用于降解某种农药的残留，基本流程如图。 下列叙述正确的是

A. 过程①的反应体系中需要加入逆转录酶和核糖核苷酸

B. 过程②需使用限制酶和DNA聚合酶，是基因工程的核心步骤

C. 过程③需要使用NaCl溶液制备感受态的大肠杆菌细胞

D. 过程④可利用分子杂交技术鉴定CarE基因是否成功导入受体细胞

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生产中为防治病虫害而大量使用农药，使农产品以及农业生态环境中农药残留严重超标。针对该现状，我国科学家经过多年研究，首创了农药残留微生物降解技术。通过筛选高效农药残留降解菌株，来清除土壤、水体、农产品中的有机污染物。其中有机磷降解菌降解甲基对硫磷（一种含氮有机农药）的效果达100%。

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以____________为唯一氮源的固体培养基上。

（2）获得纯净培养物的关键是________________________，接种前通常应将培养皿进行_______　　　　　　 灭菌，培养基进行__________　　　　　　　　　　　 灭菌。

（3）纯化菌种时，整个操作过程都应在___________　　　　　　　　 附近进行。

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回答下列（一）、（二）小题。

（一）某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。请回答下列问题：

（1）土壤悬液首先经80℃处理15分钟，其目的是筛选出_______________。

（2）在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行______________，然后涂布在含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到______________，其周围出现透明水解圈，______________比值大小与该菌所产植酸酶数量多少、活性强弱相关。

（3）筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养，培养时需要振荡，其主要目的是______________。

（4）常用固定化植酸酶处理饲料，其主要优点有________________________和可连续处理等。在建立和优化固定化植酸酶处理工艺时，除考虑_________________________、酶反应的温度、pH、作用时间等环境因素外，还需考虑的主要有固定化的方法和固定化________________。

（二）人类在预防与诊疗传染性疾病过程中，经常使用疫苗和抗体。已知目前全世界流行的新型冠状病毒为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，其疫苗生产和单克隆抗体制备的流程之一如图所示。请据图分析并回答下列问题：

（1）在基因工程中，图中A蛋白基因属于__________基因。

（2）图示B淋巴细胞来自__________（填器官），小鼠骨髓瘤细胞可以通过动物细胞培养形成不死性的____________________。

（3）过程③采用的实验技术是__________，获得的X是__________。

（4）对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的__________所制备的疫苗。对该传染病疑似患者确诊时，可从疑似患者体内分离病毒，与已知病毒进行____________________比较，或用图中的____________________进行特异性结合检测。

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