（15分）纤维素酶对于能否实现乙醇工业化生产、处理服装面料等具有重要的意义，研究者初步筛选...

（15分）纤维素酶对于能否实现乙醇工业化生产、处理服装面料等具有重要的意义，研究者初步筛选到能合成纤维素酶的菌株MC-1，以下是该菌株的鉴定过程。

（1）为了获得能合成纤维素酶的单菌落，可采用________法将初筛菌液接种在固体培养基上，这种培养基属于________培养基。

（2）关于制备固体培养基的叙述，错误的是________

A．制作固体培养基时可以加入琼脂。

B．操作的顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌。

C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板。

D．待平板冷却凝固约5-10min后将平板倒过来放置。

（3）实验过程中如何防止其他微生物的污染？________。

5）分离获得了具有较高纤维素酶活性的菌株MC-1，为了在此基础上获得纤维素酶活性更高的菌株，最可行的做法是________。

（6）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入________染料，培养后，培养基中出现透明圈，就可以鉴定其中含有纤维素分解菌。

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回答有关微生物的问题

纤维素酶对于能否实现乙醇工业化生产、处理服装面料等具有重要的意义，研究者初步筛选到能合成纤维素酶的菌株MC-1，以下是该菌株的鉴定过程。

1.为了获得能合成纤维素酶的单菌落，可采用　　　　　　　 法将初筛菌液接种在固体培养基上，这种培养基属于　　　　 培养基。

2.关于制备固体培养基的叙述，错误的是

A．制作固体培养基时可以加入琼脂。

B．操作的顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板。

D．待平板冷却凝固约5-10min后将平板倒过来放置。

3.实验过程中如何防止其他微生物的污染？ 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

4.下表的培养液pH均为4.8，若对MC-1中纤维素酶的活力进行测定，则不能选择表中的　　　　 的培养液。（多选）

5.分离获得了具有较高纤维素酶活性的菌株MC-1，为了在此基础上获得纤维素酶活性更高的菌株，最可行的做法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

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纤维素酶对于能否实现乙醇工业化生产、处理服装面料等具有重要的意义，研究者初步筛选到能合成纤维素酶的菌株MC-1，以下是该菌株的鉴定过程。

（1）为了获得能合成纤维素酶的单菌落，可采用　　　　　　　 法将初筛菌液接种在固体培养基上，这种培养基属于　　　　 培养基。

（2）关于制备固体培养基的叙述，错误的是　　　　　　　　　

A．制作固体培养基时可以加入琼脂

B．操作的顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板

D．待平板冷却凝固约5-10min后将平板倒过来放置

（3）实验过程中如何防止其他微生物的污染？　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（4）下表的培养液pH均为4.8，若对MC-1中纤维素酶的活力进行测定，则不能选择表中的　　　　　 的培养液。（多选）

（5）分离获得了具有较高纤维素酶活性的菌株MC-1，为了在此基础上获得纤维素酶活性更高的菌株，最可行的做法是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

（6）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。若在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的菌；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入________染料，培养后，培养基中出现透明圈，就可以鉴定其中含有纤维素分解菌。

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分离筛选降解纤维素能力强的微生物对于解决秸秆等废弃物资源的再利用和环境污染问题具有理论和实际意义。研究人员从土壤和腐烂的秸秆中分离筛选出能高效降解纤维素的菌株，并对筛选出的菌株进行了初步研究。

（1）对培养基进行灭菌的常用方法是　　　　　　 。为在培养基表面形成单个菌落，若以接种环为工具，则用　　　　　　 法进行接种。

（2） 先将样品悬液稀释后涂在放有滤纸条的固体培养基上进行筛选得到初筛菌株。再将初筛菌株接种到以　　　　　　 为唯一碳源的培养基培养2～5天，加入　　　　　 溶液后，依据出现的颜色反应进行筛选，观察菌落特征并测量　　　　　　　 。同时将初筛菌株制备成的菌液放入加有滤纸条的液体培养基中，恒温振荡培养8天，观察滤纸条的破损情况。结果见表。由表可知，8种菌株中1、3、7号菌株产酶能力较强,原因是　　　　　　 。

注: ① DP = （D / d） 2，其中d表示菌落直径（cm） ，D表示水解圈直径（cm）

②“+”为滤纸边缘膨胀， “+ + ”为滤纸整齐膨胀并弯曲，“+ + + ”为滤纸不定形“+ + + +”为成团糊状“+ + + + +” 为半清状

（3） 为进一步研究1、3、7号菌株对秸秆降解的效果。分别用这三种菌株对秸秆进行处理，并在第5天和第10天对秸秆和秸秆中含有的纤维素、半纤维素以及木质素等组分的降解情况进行了测定。结果见下图。

由图分析可知，三种菌株对　　　　　　 的降解最强，与第5天结果相比，第10天秸秆各组分中　　　　　　 的降解率变化最大。整体分析　　　　 号菌株的降解效果最好。

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随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。请回答：

（1）从物理状态来看CMC平板属于__________培养基，培养基中应以___________为唯一碳源，常用的灭菌方法是___________。

（2）富集培养后的菌种常采用____________法接种于CMC平板，培养一段时间后，可根据___________初步鉴定并挑取产纤维素酶菌株XZ-33。

（3）诱变选育高产纤维素酶的菌株时，通过向培养基中加入刚果红染液筛选出____________与菌落直径比大的菌落（刚果红能与纤维素形成红色复合物，但不与纤维素水解产物结合）。

（4）如图是筛选获得菌株UV-Col6过程中60Co-γ辐照剂量与致死率和正突变率（符合生产需要的突变菌数占诱变后活菌数的比例）的关系。实验结果表明，用60Co-y射线诱变处理时合适的辐照剂量为__________KGy。从基因突变的特点分析，正突变率低的原因是_________、________________。

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某些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究，人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用下表的培养基，成功地筛选到纤维素分解菌。请分析并回答问题：

（1）筛选纤维素分解菌时会在富含纤维素的环境中寻找，原因是________________有人为筛选到这样的微生物还将滤纸埋在土壤中，作用是__________________________________________。

（2）该配方是_______________培养基(根据物理状态)。这个培养基对微生物是否具有选择作用，如果具有，又是如何进行选择的？______________________________________________。

（3）选择培养能够“浓缩”所需的微生物的原因是_________________________________________

（4）一同学在纯化该类生物时，发现涂布的培养基上菌落连成一片，最可能的原因是___________________，应该采取____________措施避免出现此现象。另一同学使用划线法分离纯化菌株，经一段时间培养，发现有的线上长满了菌，有的线上无菌落，造成这种情况的原因可能是划线操作时_____________。

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阿拉伯胶是一种植物多糖，用酶解法将其降解可得到阿拉伯糖等多种重要单糖。研究人员分离筛选到一株 能合成阿拉伯胶降解酶的菌株ZHB。请回答下列问题：

（1）经初步筛选得到的ZHB菌落呈絮状突起，镜下观察发现其细胞核明显、菌丝白色致密、产生深褐色孢子。由上述特征初步推测ZHB属于____________（填“细菌”或“霉菌”）。根据这一推测，培养该菌株的培养基pH应调至____________，培养温度一般应为____________。

（2）将ZHB的孢子制成悬液，应用____________法接种，可将培养得到的ZHB单菌落用于后续研究。在培养过程中，获得纯净培养物的关键是____________。

（3）欲测定ZHB产生的阿拉伯胶降解酶的活力，应选用下表中的____________培养液。不选用其他培养液的原因是________________________________________________。

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生物乙醇是以生物为原料生产的可再生能源。我国利用农作物废弃物（秸秆）生产乙醇，其技术流程为：纤维素酶解→酵母发酵→蒸馏→成品。纤维素酶的成本能否下降，是能否实现乙醇工业化让产的关键因素。纤维素酶可以从能分解纤维素的细菌培养液中提取。某同学设计了如下离土壤中纤维素分解菌的实验流程：土壤→取样→选择培养→梯度稀释→鉴别培养。

（1）最好选择怎样的环境采集土样？________。

（2）以下是一种培养基配方：纤维素粉5g、NaNO₃ 1g、Na₂HPO₄•7H₂O 1.2g、KHPO₄ 0.9g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、KCl 0.5g、酵母膏0.5g、水解酪素0.5g（蒸馏水定容到1000ml）。该培养基能够增加样品中纤维素分解菌的浓度，其原理是________。

（3）为了鉴别纤维素分解菌和进一步纯化菌种，可以在鉴别培养基上加入____染液，将筛选获得的菌液稀释后用________方法接种到鉴别培养基上，然后挑选产生________的菌落作为菌种进行扩大培养。

（4）纤维素分解菌培养液中的纤维素酶产量如何呢？在生产中需要定量检测，请提出定量检测纤维素酶含量的实验思路。____________。

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某研究小组将产纤维素酶的株，通过诱变和高温筛选获得新菌株。为探究新菌株所产纤维素酶能否耐受80℃高温，进行了以下实验，有关实验的说法，错误的是

A.试管2中加入的纤维素酶溶液用缓冲液配制

B.应在第二步中加入适量的纤维素溶液，第三步进行80℃水浴保温

C.第五步中应加入等量的斐林试剂甲液和斐林试剂乙液

D.若纤维素酶能耐受80℃高温，则预期实验结果是试管1内呈蓝色，试管2内有砖红色沉淀产生

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蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤(配制了下列培养基，在适宜条件下培养)：

(1)为实现筛选目的，步骤Ⅰ所使用的培养基配方中，应去除______并加入高浓度的____________。该培养基从功能上看属于_______培养基。

(2)灭菌是否彻底或是否被污染需要检测，检测方法是__________。

(3)为实现目的菌的分离和计数，步骤Ⅱ所使用的培养基中还应加入____制成平板，采用的接种方法是_____________。

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