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聚羟基烷酸酯（PHA）是微生物细胞内的―种可完全降解的生物塑料新型材料，可用剧烈搅拌法萃取分离，其流程为：冷冻干燥菌体与适量氯仿混合→用组织捣碎机搅拌并加入活性炭→50℃磁力搅拌并过滤→滤液浓缩→向浓缩液中加入冷乙醇作沉淀处理→干燥得到白色透明度高的PHA。请回答：
（1）萃取时对处理的生物材料的要求是__________，组织捣碎机搅拌的目的是__________。
（2）活性炭具有很强的吸附能力，在提取过程中，使用活性炭的目的是__________。
（3）在滤液浓缩之前要进行过滤，其目的是__________。
（4）氯仿是一种易挥发的有机溶剂，在光下与空气中的氧作用会分解产生剧毒的光气。利用氯仿萃取PHA的过程简单，对设备的要求不高，但在生产上，并不是一种值得提倡的工艺，原因是_______________。
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聚羟基脂肪酸酯（PHA）是由嗜盐细菌合成的一种胞内聚酯，它具有类似于合成塑料的理化特性，且废弃后易被生物降解，可用于制造无污染的“绿色塑料”。科学家从某咸水湖中寻找生产PHA菌种的流程图如下。下列说法正确的是（ ）
①取湖水→②接种在培养基上→③培养→④挑取单菌落，分别扩大培养→⑤检测菌的数目和PHA的产量→⑥获得目标菌株
A.步骤②可用稀释涂布平板法接种到含合成塑料的选择培养基上
B.扩大培养时，接种后需要将培养基放入恒温箱倒置培养，以防杂菌污染
C.④所用到的培养基应加入琼脂，以便挑取单菌落获得纯化菌株
D.挑取菌落时，应挑取多个菌落并分别测定嗜盐细菌的PHA含量
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聚羟基脂肪酸酯（ PHA）是一种结构多样化、生物可降解的高分子聚合物，广泛应用于生活、医药、农业等多个方面。许多野生型微生物可以天然产生不同种类的PHA。科学家应用基因工程等技术，对野生嗜盐细菌进行改造， 作为高效生产PHA 的底盘微生物。
（1）基因工程常用原核生物作为受体细胞，原因是________________________。
基因工程的核心步骤是________________。
（2）科学家对嗜盐菌进行基因改造，使一种嗜盐菌能够产生多种PHA，利用的原理是基因控制性状途径中的________________________________。
基因改造需要用到的基因工程的工具酶是________________________________。
（3）PHA 在细菌细胞内的积累量可能受到细菌细胞体积的限制。科学家发现，让细菌的细胞分裂抑制因子SulA 或MinCD基因“过表达”，可以使细菌细胞不能正常分裂而形成纤维状延长的细菌，以提高细胞 PHA 的积累量。实验的关键是对SulA 或MinCD基因中的______________（填入相关的基因结构）进行改造。
（4）PHA被看好用于开发人工食道、神经导管等医疗材料，研究中可用动物细胞法判断PHA对细胞的毒性。基本研究思路是：首先使被培养细胞处于_______的环境；将细胞所需的基本营养物质按种类和所需数量严格配置成培养基，此类培养基称为__________________，在此培养基中还要加入___________，此外，通常还需加入血清等天然成分；在适宜环境条件下培养一段时间，根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断PHA的毒性。
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（2014•河南模拟）聚羟基丁酸酯可被用于制造生物可降解塑料．如图是科研人员用微生物发酵技术以蔗糖为原料生产生物可降解塑料的过程示意图，请据图回答：
（1）制备筛选碱性天然菌种的培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、 倒平板 ．培养基中的蔗糖可以为微生物的生长提供 碳源 ．该培养基除含有微生物所需的各种营养物质外，还应注意调整适宜的 PH ．
（2）为了获得纯净的培养物，实验用的培养基最好选用 高压蒸汽灭菌 法进行灭菌．
（3）为了检测菌液中活菌的数量是否适宜，可以采用 显微镜直接计数（稀释涂布平板法） 法进行计数，该方法计数的结果与实际数目相比 偏大（偏小） （偏大/偏小）．
（4）为使微生物易于从发酵液中分离且达反复使用的目的，可采用 固定化细胞 技术进行处理．该技术通常采用的方法是 包埋法 ．
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聚羟基丁酸酯可被用于制造生物可降解塑料。下图是科研人员用微生物发酵技术以蔗糖为原料生产生物可降解塑料的过程示意图，请据图回答：
(1)制备筛选碱性天然菌种的培养基的一般步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、_________。培养基中的蔗糖可以为微生物的生长提供_________。该培养基除含有微生物所需的各种营养物质外，还应注意调整_________。
(2)为了获得纯净的培养物，实验用的培养基最好选用_________法进行灭菌。
(3)为了检测菌液中活菌的数量是否适宜，可以采用_________法进行计数，该方法计数的结果与实际数目相比_________（偏大／偏小）。
(4)为使微生物易于从发酵液中分离且达到反复使用的目的，可采用___________技术进行处理该技术通常采用的方法是__________。
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自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧的种类能产生 PHB（一种可以被生物降解的塑料）。现欲获得高产 P HB 的自生固氮菌菌种，操 作流程如下：采集土样-富集培养-分离、纯化培养-初步筛选产 PHB 固氮菌-筛选高产 PHB 固氮菌-保存备用。
回答下列问题：
（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加_____。培养时要将装有培养液的锥形瓶放置在摇床上，其目的是_____。
（2）进行分离、 纯化培养时， 要先将培养基 倒入培养皿中 ，制成平板。 此时所使用的 培养 基与富集培养时有所不同，其中添加了一定量的_____。倒平板时，要待高压灭菌后的培养基_____，再在_附近操作。平板冷凝后，需置于恒温箱中 1-2天后再用于接种，目的是_____。
（3）分离纯化培养后，得到 8 种形态特征有所不同的单菌落。经染色鉴定，其中 3 种能产 生 PHB。那么如何进一步筛选出高产 PHB 的菌种呢？请说出你的实验思路_____。
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塑料（聚乙烯）在自然界中很难降解，俗称“白色污染”，北京航天大学杨军教授偶然发现装米的塑料袋上有许多孔洞，还有虫子和飞蛾爬出。带着这些疑问，杨军教授对虫子消化道的微生物进行分离，从而找到了能降解塑料的微生物，回答有关问题：
（1）实验室分离聚乙烯塑料降解菌时应当以_________为唯一碳源。在获取肠道微生物后应先进行选择培养，其目的是__________,选择培养时所用的培养基从物理性质上属于____________培养基。
（2）对选择培养后的微生物分离时，可以釆用平板划线法和稀释涂布平板法，当采用平板划线法分离微生物时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是___________，当釆用稀释涂布平板法分离微生物时，_________(需要/不需要）进行梯度稀释。两种方法都得到了多种菌落，根据它们的菌落特征对细菌进行分类，菌落特征包括菌落形状、大小、________和__________等方面。
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塑料（聚乙烯）在自然界中很难降解，俗称“白色污染”，北京航天大学杨军教授偶然发现装米的塑料袋上有许多孔洞，还有虫子和飞蛾爬出。带着这些疑问，杨军教授对虫子消化道的微生物进行分离，从而找到了能降解塑料的微生物，回答有关问题：
（1）实验室分离聚乙烯塑料降解菌时应当以_________为唯一碳源。在获取肠道微生物后应先进行选择培养，其目的是__________,选择培养时所用的培养基从物理性质上属于____________培养基。
（2）对选择培养后的微生物分离时，可以釆用平板划线法和稀释涂布平板法，当采用平板划线法分离微生物时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是___________，当釆用稀释涂布平板法分离微生物时，_________(需要/不需要）进行梯度稀释。两种方法都得到了多种菌落，根据它们的菌落特征对细菌进行分类，菌落特征包括菌落形状、大小、________和__________等方面。
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完全生物降解塑料（BDP）是淀粉与可降解聚酯的共混物，废弃物适合堆肥或墳埋等处理方式，能被微生物完全分解，可持续替代以石油为原料的传统塑料，从而避免“白色污染”。回答下列问题。
（1）从填埋BDP的土壤中分离BDP分解菌的步骤是先从土壤取样并接种在液体培养基上，进行为期5天的_____________培养，以增加该菌的浓度；再将样品进行____________后，涂布接种到固体培养基上，以进一步分离纯化该菌。
（2）当淀粉被淀粉酶分解后，经稀碘液处理，培养平板上会出现以BDP分解菌为中心的____________。提纯淀粉酶可以采用凝胶色谱法，该方法是根据___________________分离蛋白质，所用凝胶的化学本质大多为_________________________。
（3）淀粉酶适宜采用__________________法固定化。某同学选用海藻酸钠作载体制备固定化BDP分解菌，制得的凝胶珠不是圆形或椭圆形，其主要原因是_____________________________。
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【生物——选修1：生物技术与实践】
自生固氮菌是一类能独立固定氮气的细菌，其中有些好氧的种类能产生PHB（一种可以被生物降解的塑料）。现欲获得高产PHB的自生固氮菌菌种，操作流程如下：采集土样→富培养→分离、纯化培养→初步筛选产PHB的自生固氮菌→筛选高产PHB固氮菌→保存备用。 回答下列问题：
（1）富集培养时，为达到筛选自生固氮菌的目的，在配制培养液时不应添加_________。培养时要将装有培养液的锥形瓶旋转在摇床上，其目的是_________________。
（2）进行分离、纯化培养时，要先将培养基倒入培养皿中，制成平板。此时所使用的培养基与富集培养时有所不同，其中添加了一定量的_______________。倒平板时，要待高压灭菌后的培养基____________，再在______________附近操作。平板冷凝后，需置于恒温箱中1-2天后再用于接种，目的是______________。
（3）分离纯化培养后，得到8种形态特征有所不同的单菌落。经染色鉴定，其中3种能产生PHB，那么如何进一步筛选出高产PHB的菌种呢？请说出你的实验思路。
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