为获得高效降低胆固醇的乳酸菌，科研人员作了如下实验。（1）取适量发酵酸肉，剪碎并研磨，磨碎...

为获得高效降低胆固醇的乳酸菌，科研人员作了如下实验。

（1）取适量发酵酸肉，剪碎并研磨，磨碎后加入________制成1：10稀释液，再梯度稀释到10-6的稀释液，涂布于添加了CaCO3的乳酸细菌培养基（MRS培养基）平板上，在________条件下恒温静置培养48小时。挑取具有________的菌落，用________法接种在MRS培养基上纯化。可通过观察菌落的________判断是否达到了纯化。

（2）纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后离心测定________中胆固醇的含量，以________作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株。

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为获得高效降低胆固醇的乳酸菌，科研人员作了如下实验。

（1）取适量发酵酸肉，剪碎并研磨，磨碎后加入__________制成1:10稀释液，再梯度稀释到10-6的稀释液，涂布于添加了CaCO3的乳酸幼苗培养基（MRS培养基）平板上，在__________条件下恒温静置培养48小时。挑取具有__________的菌落纯化培养，通常使用的划线工具是__________。示意图A和B中__________表示的是该方法接种培养后得到的结果。可通过观察菌落的__________判断是否达到了纯化。

（2）纯化后的乳酸菌菌株接种到高胆固醇培养液中培养，一段时间后离心测定__________（填“上清液或沉淀细胞”）中胆固醇的含量，以____________________作为对照，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出具有目的菌株。

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[生物——选修1：生物技术实践]

据报导，三分之一的缺血性心脏疾病是由于高胆固醇造成的。研究发现某种乳酸菌能降低胆固醇，科研人员利用微生物分离培养技术来获得能高效降低胆固醇的乳酸菌。回答下列问题：

（1）乳酸菌是一种原核生物，其发酵过程会以胆固醇作为_____________。取适量发酵的酸肉，剪碎、研磨然后加入无菌水稀释，目的是_________________。　

（2）对乳酸菌的选择培养基进行的灭菌方法是_____________。刚刚制作好的平板需冷却后并倒立放置，可__________________________。

（3）将选择的菌株接种到高胆固醇培养液中，一段时间后离心，测定_____________（填“上清液” 或“下清液”）中的胆固醇含量，并通过与_____________比较，测定菌株降低胆固醇的能力。对利用胆固醇的乳酸菌菌种长期保存的方法是__________________________。

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为了培育高效利用木糖发酵产乳酸的菌株，科研人员将能利用木糖产乳酸的菌种搭载于中国“实践八号”育种卫星，卫星返回后进行筛选，其主要流程如下图，其中乳酸能溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈。请回答：

（1）与步骤②相比，步骤③的培养基成分还含有_______、______。两培养基均以木糖作为唯一碳源的目的是________。

（2）步骤③中，应在________附近倒平板，不采用涂布接种的原因是_________。平板在适宜条件下培养一段时间后，筛选有透明圈的菌落作为候选菌。

（3）科研人员从候选菌中初步筛选出产乳酸能力较强的四种菌株，再通过连续转接和液体发酵进行遗传稳定性检测，得到下表所示结果（单位：g·L-1），最终确定卫10为最优菌株，依据是________。

（4）若要进一步探究卫10发酵的最适木糖浓度，试写出实验思路：________。

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酸豆乳是以豆乳（豆浆和脱脂奶粉按适当比例混合制成）为原料，经乳酸菌发酵而成，营养丰富且胆固醇和乳糖的含量低。研究人员为了提高酸豆乳的品质进行了相关实验。回答下列问题。

（l）乳酸菌繁殖所需要的营养物质有水、无机盐、____。

（2）为筛选目的乳酸菌种，在严格无菌操作下，先将含豆乳的培养液灭菌，____，再分别接种待选的不同乳酸菌种，37℃恒温发酵l0h，发酵过程中某些组别需要排气，原因是____产生气体。发酵后，需要检测和比较的发酵液主要指标有____（写出3个）。

（3）利用海藻酸钠作为载体，固定上述筛选所得菌种并进行实验，流程为：配制海藻酸钠溶液一海藻酸钠溶液与乳酸菌混合一固定化乳酸菌细胞一无菌水清洗一固定化乳酸菌产酸效率实验。

①实验中固定化乳酸菌的技术属于____法，与不进行固定化相比，采用该技术的优点是____。

②无菌水清洗凝胶珠的目的是____。

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为了从泡菜汁中筛选分离出发酵产酸速度快、亚硝酸盐降解能力强的乳酸菌，科研人员做了如下实验（实验室中常用MRS培养基培养乳酸菌，在加入CaCO₃的MRS培养基中，菌落周围能形成透明圈）。

请回答问题：

（1）在无菌操作下，使用无菌水对泡菜汁进行_________，将不同稀释度的泡菜汁涂布于添加了CaCO₃的乳酸细菌培养基（MRS培养基）平板上。在适宜条件下培养后，挑取有_________________的菌落，立即继续在MRS平板上用________法分离，得到单菌落。

（2）加入CaCO₃的MRS培养从功能上看属于________培养基。取分离到的乳酸菌接入MRS液体培养基中，间隔取样测定pH，目的是筛选出_______________的乳酸菌。

（3）取上一步筛选出的乳酸菌接入含有NaNO₂的MRS培养基中，培养一段时间后，用比色方法测定NaNO₂的含量，筛选出_____________的菌株。

（4）乳酸菌细胞结构的最主要特点是___________，其代谢类型为__________。

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(6分)科研人员为探究诱导酵母原生质体摄取蚕豆叶绿体的适宜条件，进行了如下实验。

① 提取蚕豆叶绿体：过滤蚕豆新鲜叶片研磨液，对滤液进行_A_后获得叶绿体，加入2 mL 0.35 mol·L^－1氯化钠溶液，制成悬浮液。

② 制备酵母原生质体：在适宜条件下用2%的蜗牛酶处理酵母菌，获得酵母原生质体。

③ 诱导酵母原生质体摄取蚕豆叶绿体：将酵母原生质体与蚕豆叶绿体混和后，在不同温度和pH下用聚乙二醇(PEG)处理60 min后洗涤。用显微镜观察，结果如下表：

请回答：

(1)补全实验步骤：A ________________________。

(2)步骤①中加入0.35 mol·L^－1氯化钠的作用是________________________。

(3)步骤②中蜗牛酶的作用是除去酵母细胞的________________。

(4)实验结果表明酵母原生质体摄取蚕豆叶绿体较适宜条件是________________。在适宜温度下，酵母原生质体容易摄入叶绿体与细胞膜的______________增强有关。

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泡菜的制作离不开乳酸菌，但酵母菌对泡菜的风味和品质也有着重要影响，为研究泡菜发酵过程中酵母菌种群数量的动态变化和pH变化，科研人员选用3份泡菜“老盐水”Y1、Y2、Y3和新鲜萝卜进行了以下实验。请完善下列实验过程并分析回答：

(1)制作泡菜

______________________

(2)酵母菌的分离、纯化及鉴定

无菌操作下每天取泡菜盐水25mL，加入________mL无菌水中，将样品稀释十倍，再依次稀释成102、103、104、105倍稀释液，分别接种涂布，置于28℃恒温培养箱中培养24h，观察菌落特征，并选取培养基上的________用于DNA分子鉴定。

(3)菌落计数和盐水中的pH值测定

选取便于计数的培养基对不同种酵母菌的菌落分别计数，用此方法计数和直接在显微镜下计数菌体相比，得到的数值往往偏小，原因有________，________。同时，每天用精密pH计测定盐水中的pH值。

(4)结果分析

实验持续15天，部分实验结果如下：

①发酵后期，膜璞毕赤酵母数量减少，甚至消失，从种间竞争的角度分析原因可能是__________________________________________________。

②采用Y1老盐水泡制萝卜10d后，泡菜表面出现白膜(俗称“生花”)，这可能与Y1发酵液中后期________较多有关，其存在时间较长的原因可能是__________________________________________________。

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科研人员从肿瘤细胞中发现了蛋白S，为了研究其功能做了如下实验：将DNA模板和RNA聚合酶混合一段时间后加入原料，其中鸟嘌呤核糖核苷酸用32P标记，一起培育一段时间后加入肝素(可以与RNA聚合酶结合)，然后再加入蛋白S，结果如下图所示。下列叙述错误的是（　　 ）

A.RNA聚合酶能识别DNA模板上特定的位点起始密码子并与之结合，催化RNA的合成

B.肝素与RNA聚合酶结合后能破坏RNA聚合酶的空间结构并使之失去活性

C.对照组应加入不含蛋白S的缓冲液，实验组加入肝素后基本没有新的mRNA合成

D.曲线反映的是模板DNA的转录形成RNA的过程，蛋白S能解除肝素抑制转录的作用

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科研人员从肿瘤细胞中发现了蛋白S，为了研究其功能做了如下实验：将DNA模板和RNA聚合酶混合一段时间后加入原料，其中鸟嘌呤核糖核苷酸用32P标记，一起温育一段时间后加入肝素（可以与RNA聚合酶结合），然后再加入蛋白S，结果如下图所示。下列叙述不正确的是

A. 对照组应加入不含蛋白S的缓冲液

B. 加入肝素后没有新的mRNA合成

C. 曲线反映的是模板DNA的复制过程

D. 蛋白S能解除肝素抑制转录的作用

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