下图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图，请据图回答下列问题。（1）过...

下图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图，请据图回答下列问题。

（1）过程①表示_________。为了使目的基因正常表达，其首端必须有启动子，它是___________的部位。若限制酶切出了平末端，要选择___________进行连接。（填“E·coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）

（2）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为____________________。它是利用运载体Ti质粒中含有___________序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。

（3）图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞后，长芽、生根的过程中采用了细胞工程的___________技术，该技术的原理是______________________。

（4）检测烟草植株细胞中乙肝表面抗原基因是否合成出乙肝表面抗原蛋白，采用的方法是_____________。

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(12分)【生物——现代生物科技专题】我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是乙肝表面抗原蛋白。下图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图，请据图回答：

(1)过程①表示_________。为了使目的基因正常表达，其首端必须有______识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择___________进行连接。

(2)目的基因通过过程②进入农杆菌细胞内，并在农杆菌细胞内维持稳定和表达的过程称为___________。

(3)将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为________________。

(4)将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞后，需要进行基因的检测与鉴定：首先检测____是否插入了乙肝表面抗原基因；其次检测_____是否转录出相应的mRNA；最后检测乙肝表面抗原基因是否翻译出乙肝表面抗原蛋白，检测的方法是____________。

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预防乙肝最有效的途径是接种疫苗。将乙肝表面抗原基因转移到植物细胞内可生产乙肝疫苗。回答下列问题。

（1）欲在短时间内大量扩增乙肝表面抗原基因。通过______（填写中文名称）技术，其原理是_______，利用该技术扩增乙肝表面抗原基因的前提是________。

（2）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，此外采用_____法十分简便经济。用抗原——抗体杂交技术检测植物细胞是否成功合成乙肝表面抗原蛋白，若有_______出现，表明目的基因已形成蛋白质产品。

（3）将乙肝表面抗原基因导入植物细胞后，采用_______技术获得愈伤组织，该技术需在_______条件下进行。

（4）乙肝疫苗在2～8℃条件下保存，其不宜在常温下保存最可能的原因______。

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乙型肝炎是由乙肝病毒（一种DNA病毒）引起的一种慢性传染病。临床上用于预防乙肝的疫苗大多数为基因工程疫苗，其有效成分是乙肝病毒表面的抗原蛋白（简称乙肝表面抗原）。如图为乙肝疫苗的生产过程示意图，回答下列问题：

（1）在疫苗生产过程中，需要从乙肝患者的肝细胞中提取乙肝表面抗原的mRNA，原因是_______________然后利用乙肝表面抗原的mRNA在_______________催化作用下合成乙肝表面抗原基因。

（2）图中①过程为_______________，为使乙肝表面抗原基因正常表达，基因表达载体的首端需要添加启动子，作用是___________________。

（3）图中三种方法均可获得相同的乙肝疫苗，其理论依据是_______________。为提高重组DNA导入酵母菌的转化效率，常用_______________溶液处理酵母菌细胞。从微生物的特点角度分析，用发酵工程的方法生产乙肝疫苗的优点是_______________。

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[生物——选修3：现代生物科技专题]（15分）

将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，为预防乙肝开辟了一条新途径。请回答下列问题：

（1）获得乙肝病毒表面抗原基因后，常利用_________________技术进行扩增。把基因转入农杆菌内时常用_________________处理农杆菌，使之成为感受态细胞。

（2）使用农杆菌将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可将乙肝病毒表面抗原基因转移至草莓细胞中的_________________上。目的基因进入草莓细胞内并在草莓细胞内维持稳定和表达，这个过程称为_________________。

（3）在基因工程操作过程中，需要用_________________酶和_________________酶构建基因表达载体，基因表达载体要有_________________，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。

（4）在分子水平上，可采用_______________的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。

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将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，为预防乙肝开辟了一条新途径。请回答下列问题：

（1）获得乙肝病毒表面抗原基因后，常利用______技术进行扩增。构建的基因表达载体要有________，以便筛选出含有目的基因的受体细胞。把基因转人农杆菌内时常用________处理农杆菌。

（2）使用农杆菌将乙肝病毒表面抗原基因导入草莓细胞中后，还需要采用__________技术培育成植株。培育过程中器官发生和形态建成，主要通过平衡的_________进行调控。从变异角度看，转基因育种的原理是_______________。

（3）在分子水平上，可采用____________的方法来检测转基因草莓果实提取液中有无相应的抗原。

（4）假定抗虫基因插入宿主染色体的部位是随机的。且整合到染色体上的抗虫基因均正常表达。对这些转基因草莓进一步研究发现，其中一些植株体细胞中含两个抗虫基因。让这些转基因草莓植株自交，发现大约有1/16的子代果实中未提取到相应的抗原，可能的原因是______________________________。

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由于乙肝病毒不能用动物细胞来培养，因此无法用细胞培养的方法生产疫苗，但可用基因工程的方法进行生产，现已知病毒的核心蛋白和表面抗原蛋白的氨基酸序列，生产示意图如下，下列相关说法不正确的是（    ）

A.生产乙肝疫苗的过程也达到了定向改造细菌的目的

B.在①②过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶

C.用于生产疫苗的目的基因为编码核心蛋白的基因和表面抗原蛋白基因

D.③过程中细菌经有丝分裂产生大量新个体

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由于乙肝病毒不能用动物细胞来培养，因此无法用细胞培养的方法生产疫苗，但可用基因工程的方法进行生产，现已知病毒的核心蛋白和表面抗原蛋白的氨基酸序列，生产示意图如下，下列相关说法不正确的是（  ）

A.生产乙肝疫苗的过程也达到了定向改造细菌的目的

B.在①②过程中需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶

C.用于生产疫苗的目的基因为编码核心蛋白的基因和表面抗原蛋白基因

D.③过程中细菌经有丝分裂产生大量新个体

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啤酒酵母是啤酒工业发酵菌种，对啤酒的品质、风味有很大影响。请回答：

（1）科研人员将表达乙肝病毒表面抗原的基因构建在重组质粒中，进而转入___，发酵生产 转基因酵母乙肝疫苗。在构建重组质粒过程中，通过同种限制性核酸内切酶（-G↓AATTC-）切割得到的一个目的基因和一个开环质粒，共有 __（A．1 个　　 B．2 个　　 C．3个D．4 个）粘性末端。将重组质粒导入受体细胞的操作步骤完成以后，需要对所有受体细胞进行筛选，这是因为___。该转基因技术实践应用的成功标志是 __。

（2）转基因技术结合胚胎工程在高等动物育种中也有成熟应用。人们将经过基因改造的胚胎干细胞核与 __融合，得到___，并促使其在体外分裂发育成 __，再通过胚胎移植获得后代。目前胚胎移植是胚胎工程中获得后代的唯一方法，其原因是 __。

（3）胚胎干细胞具有重要的生产和临床医学价值。在培养胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备一层细胞，称为 __，其作用是 __。

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研究人员将乙肝病毒的表面抗原（HBsAg)基因转入番茄幼叶细胞中，获得能产生乙肝疫苗的番茄植株。回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增HBsAg基因时，目的基因DNA受热变性后的单链与引物互补序列结合，在_______酶的作用下进行延伸。设计的引物含有ClaⅠ酶切位点和SacⅠ酶切位点，用作载体的DNA分子________(填“含有”或“不含有”）ClaⅠ酶切位点和SacⅠ酶切位点，理由是________________。

（2）将HBsAg基因导入番茄幼叶细胞最常用的方法是______________，该方法可以使目的基因插入到细胞中______________的DNA上。

（3）可利用植物组织培养技术获得转基因番茄植株，该技术利用的原理是________________。

（4）通过电镜对番茄果实提取物进行观察，发现了HBsAg颗粒，说明目的基因导入受体细胞后_________。用获得的转基因番茄果实饲喂小鼠，如果在小鼠血清中检测到_____________，说明转基因植物疫苗可口服。

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