（12分）普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如下图所示。已知含抗盐基因的DNA和质粒上...

（12分）普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如下图所示。已知含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，质粒上另有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。请回答问题：

1.构建重组质粒时，应选用限制酶____________对____________进行切割，以保证它们定向连接。限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键，具体说就是____________和____________之间的键。

2.如果目的基因直接注入烟草细胞，一般会被烟草细胞____________。质粒的作用是____________。

3.切割后的目的基因与质粒由____________酶连接成重组质粒。筛选导入重组质粒的细菌，应在其培养基中加入___________，理由是__________________。

4.烟草细胞经_______________形成愈伤组织。某研究性学习小组以愈伤组织为材料进行了下列实验：一组在培养基中加30%的蔗糖，另一组不加蔗糖，接种后，每组再分成两个小组，分别在光下和黑暗中培养。1个月后，观察其生长、分化情况，结果见下表：

你能得出什么结论？______________________________________。

5.从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是___________________。

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研究人员将抗盐基因转入普通烟草培育出抗盐烟草，该过程所用的质粒与含抗盐基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示。限制性核酸内切酶BamHI、BclⅠ、Sau3AⅠ、HindⅢ，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓GATCC、T↓GATCA、↓GATC、A↓AGCTT。图3表示该过程中利用含目的基因的农杆菌进行转化作用的示意图。请回答下列问题。

（1）图1质粒中没有标注出来的基本结构是　　　　　　　　 。

（2）用图中质粒和目的基因构建基因表达载体时，应选用限制酶　　　　　 　 切割质粒，选用 　　　　　　 限制酶切割含目的基因的DNA片段。限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的　　　　 键。

（3）将上述切开的质粒与目的基因混合，加入DNA连接酶连接后，导入受体受体细胞，受体细胞的类型（对两种抗生素表现出抗性R或敏感性S）包含 　　　　　　 （不考虑基因突变）。

①XR、YR　　　　 ②XR、YS　　　　 ③XS、YR　　　　 ④XS、YS

（4）将图3过程　　　　　　 （填序号）中发生了基因重组，过程②、③所用的培养基中，通常要调控好　　　　 两类激素的比例。

（5）从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是　　　　　　　 。

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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用______________催化连接，两个DNA片段的连接结果有________种。

（2）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_____________________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加。

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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，它们的识别序列和黏性末端各不相同。质粒同时也含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

(1)将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种变异属于________。

(2)如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能________________________________。

(3)在构建重组质粒时，应选用________和________两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

(4)基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，下图表示运用影印培养法(使一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法)检测基因表达载体是否导入了农杆菌。

培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________、________。从检测筛选的结果分析，含有目的基因的是________(填数字)菌落中的细菌。为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用__________标记的含抗盐基因的DNA片段作探针进行分子杂交检测，又要用______________的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

(5)将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加______。

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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam_HI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）在构建重组质粒时，应选用_______和________两种限制酶对_______进行切割，然后进行连接，以保证重组DNA序列的唯一性。

（2）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加__________，理由是_____________。

（3）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_____技术，即通过_____和________两个主要过程最终形成完整植株。

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某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、Bam_HI三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）在构建重组质粒时，应选用_______和________两种限制酶对_______进行切割，然后进行连接，以保证重组DNA序列的唯一性。

（2）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加__________，理由是_____________。

（3）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_____技术，即通过_____和________两个主要过程最终形成完整植株。

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【生物一选修3:现代生物科技专题】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是________________。

（2）在构建重组质粒时，应选用__________和__________两种酶对目的基因和质粒进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否己含有目的基因？

__________(是/否)。为什么？_________________________________________________。

（4）愈伤组织经__________形成完整植株，这一过程需要再转接到___________培养基上进行培养，该过程的实质是__________________。

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某质粒和含抗盐基因的DNA片段上均有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制性核酸内切酶酶切位点，同时质粒上还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因（如下图）。下列相关叙述错误的是

A．SalⅠ酶切后可产生质粒-质粒、质粒-抗盐基因和抗盐基因-抗盐基因三种两两连接产物

B．用SalⅠ和HindⅢ两种限制性核酸内切酶切可保证质粒与抗盐基因的定向连接

C．用BamHⅠ和SalⅠ两种限制性核酸内切酶切得不到含目的基因的重组质粒

D．在同时添加氨苄青霉素和四环素的培养基中可筛选得到含重组质粒的受体细胞

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科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。如图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答：

(1)①过程获得的抗盐基因可用PCR技术进行扩增，该技术必须用________酶，所需的原料是______________。

(2)已知几种限制酶识别序列及其切割位点如表：

用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ酶切割，原因是______________________________。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用____________________酶对外源DNA、质粒进行切割。

(3)图中⑤、⑥依次表示组织培养过程中抗盐烟草细胞的________、________过程。

(4)为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的________作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是_____________________________________

___________________________________________________________________________________。

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科学家从某细菌中提取抗盐基因，转入烟草并培育成转基因抗盐烟草。下图是转基因抗盐烟草的培育过程，含目的基因的DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点。请分析回答下列问题：

（1）在该过程中，研究人员首先获取了抗盐基因（目的基因），并采用　　　　　　　 技术对目的基因进行扩增，该技术需要的条件是　　　　　　　 、酶、原料、模板,该技术必须用　　　　　　 酶；然后构建基因表达载体，基因表达载体中除了具有目的基因、启动子和终止子之外，还需具有　　　　 。

（2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaⅠ酶切割，原因是　　　　　　　　　　　　　　　　 。图中①②过程为防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，应选用　　　　　　　　　　　 酶对外源DNA、质粒进行切割。

（3）为确定转基因抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的　　　　　　　　　　　　 作探针进行分子杂交检测，又要在个体水平上鉴定，后者具体过程是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 __________。

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