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（15 分） 科研人员将绿色荧光蛋白（GTP）基因导入金鱼的受精卵中进行有关研究，请回答：
（1）上述过程中的 GTP 基因称为 , 该基因可由 mRNA 形成。
（2）已知 GTP 基因的 DNA 两端分别有 EcoR I、Sma I切割位点，切割下来的 GTP 基因含有 末端和 末端。
（3）质粒用 EcoR I、Sma I 切割之后，需用 将 GTP 基因与其连接形成重组质粒。
（4）GTP 基因重组质粒导入受精卵通常用 法，受精卵经过卵裂、桑椹胚、 、原肠胚等阶段发育为胚 胎。紫外光下观 察，可以看到转基因鱼发光部位存在差 异，其原因是 。
（5）构建重组质粒时，可用 GTP 代替抗氨苄青霉素基因作为 。
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科研人员将某种荧光蛋白(GFP)基因导入金鱼的受精卵中来进行有关研究，请回答：
（1）以上过程的GFP基因称为______基因，该基因可由mRNA________形成。
（2）已知含GFP基因的DNA两端分别有EcoRI 与 SmaI切割位点，切割下来的GFP基因含有____末端和______末端。
（3）质粒用EcoRI、SmaI切割之后，需用___________酶将GFP基因与其连接形成重组质粒。
（4）构建重组质粒时，可用GFP基因代替抗氨苄青霉素基因作为_____________。
（5）GFP基因重组质粒导入受精卵通常用__________法，受精卵经过卵裂、桑堪胚、______、原肠胚等阶段发育为胚胎。紫外光下观察，可以看到转基因鱼发出荧光的部位存在差异，其原因是_________________________。
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科研人员将绿色荧光蛋白基因转入小鼠受精卵中，可直接观察小鼠的胚胎发育进程。根据有关过程回答下列问题：
（1）从基因工程的角度判断，绿色荧光蛋白基因属于__________基因，在基因工程中，能被RNA聚合酶识别和结合，并能驱动转录的DNA片段称为____________。
（2）给供体雌鼠注射一定量的促性腺激素促使其____________。雌鼠受精后可以得到大量含雌雄原核的卵细胞。
（3）通常采用显微注射技术将绿色荧光蛋白基因导入受精后的卵细胞中，下图为注射前的卵细胞，注射时应将含目的基因的DNA注入卵细胞的____________部分。
（4）培养受精卵的培养液中需添加的天然成分是_________________，培养环境需保持一定浓度C02的目的是___________________________。
（5）将培养好的胚胎移植到经____________处理的受体雌鼠体内，观察发育中的胚胎，发现部分胚胎没有绿色荧光，原因可能是_________________。
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[生物——选修3:现代生物科技专题]
研究人员将人工丝蛋白基因导入到蚕卵内，对蚕卵的基因改造获得成功。含有人工丝蛋白的蚕茧发出绿色荧光，比正常的蚕茧更加轻薄。请回答下列问题：
（1）进行转基因操作前，需用_____________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。将人工丝蛋白基因导入到蚕卵体内，常用的方法是_____________。
（2）绿色荧光蛋白基因可以作为_____________，用于鉴别和筛选蚕卵中是否含有人工丝蛋白基因。
（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导人家蚕细胞。PCR技术利用的原理是_____________，该PCR 反应体系的主要成分应该包含扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、_____________和_____________。
（4）生物反应器培养家香细胞时会产生接触抑制，所以培养时通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器 中，这样可以通过_____________来增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
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（10分）研究人员利用生物工程技术，探究猪bmp15基因在不同组织细胞中的特异性表达。该工程技术基本流程如下图（EGFP基因控制合成增强型绿色荧光蛋白；过程②表示表达载体2成功导入各组织细胞）。请回答：
（1）过程①中，需利用 限制酶处理表达载体1。
（2）过程②中，常采用 技术将表达载体2成功导入受体细胞。
（3）培养受体细胞时，通常需在培养液中添加一定量的 ，以防污染。
（4）在实验结果的基础上，提取上述猪肌肉细胞的 （mRNA/DNA），利用标记的EGFP基因作探针，进行分子杂交，可进一步探究猪bmp基因特异性表达的原因。
（5）据实验结果推测，猪bmp15基因在 细胞特异性表达。
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科研人员将红色荧光蛋白基因导入烟草细胞培育转基因烟草，如图①②③为两个红色荧光蛋白基因随机整合在染色体上的三种转基因烟草的体细胞示意图。不考虑交叉互换和突变，下列说法正确的是
A.植株①减数分裂产生的卵细胞中一定不含有红色荧光蛋白基因
B.植株③的一个花粉细胞中至少含有1个红色荧光蛋白基因
C.处于有丝分裂后期时有4条染色体含有红色荧光蛋白基因的细胞来自植株①②③
D.处于减数第二次分裂后期时可能含4个红色荧光蛋白基因的细胞来自植株①和③
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关于绿色荧光蛋白方面的相关问题，有很多学者进行了研究和探索。请回答下列与绿色荧光蛋白有关的问题：
（1）绿色荧光蛋白基因最初是从水母中分离到的，这个基因共包含有5170个碱基对，控制合成由238个氨基酸组成的荧光蛋白，由此推测，翻译该蛋白质的mRNA碱基数量至少有__________个。
（2）如果基因两端的碱基序列如图甲所示，则构建重组DNA分子时所用的DNA连接酶作用于图甲中的_____处（a或b）。
（3）图乙是荧光蛋白基因表达过程中的_____阶段，图中3和4代表的核苷酸依次是_______、________（填中文名称）。
（4）科学家进行此项转基因动物的研究，目的是为寻找基因异常所引起的疾病的治疗方法。通过特定的方法可以使绿色荧光蛋白基因与特定基因相伴随，从而使科学家更为容易地研究相关遗传疾病。下图是某遗传病的遗传系谱图（控制基因为B和b），请据图分析回答：
此遗传病的致病基因是_____性基因（填“显”或“隐”），最可能位于_____染色体上。由此推测Ⅱ3和Ⅱ4再生一个表现正常的孩子的概率是_______；Ⅱ5和Ⅱ6再生一个正常男孩的概率是_____。
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关于绿色荧光蛋白方面的相关问题，有很多学者进行了研究和探索。请回答下列与绿色荧光蛋白有关的问题：
（1）绿色荧光蛋白基因最初是从水母中分离到的，这个基因共包含有5170个碱基对，控制合成由238个氨基酸组成的荧光蛋白，由此推测，翻译该蛋白质的mRNA碱基数量至少有__________个。
（2）如果基因两端的碱基序列如图甲所示，则构建重组DNA分子时所用的DNA连接酶作用于图甲中的_____处（a或b）。
（3）图乙是荧光蛋白基因表达过程中的_____阶段，图中3和4代表的核苷酸依次是_____________、_______________（填中文名称）。
（4）科学家进行此项转基因动物的研究，目的是为寻找基因异常所引起的疾病的治疗方法。通过特定的方法可以使绿色荧光蛋白基因与特定基因相伴随，从而使科学家更为容易地研究相关遗传疾病。下图是某遗传病的遗传系谱图（控制基因为B和b），请据图分析回答：
此遗传病的致病基因是_____性基因（填“显”或“隐”），最可能位于_____染色体上。由此推测Ⅱ3和Ⅱ4再生一个表现正常的孩子的概率是_______；Ⅱ5和Ⅱ6再生一个正常男孩的概率是_____。
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科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体，利用载体将荧光素基因导入人淋巴瘤细胞。操作过程中含有以下几个过程：
(1)利用FCR技术扩增荧光素酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为(5’－GAACA………AAAAC－3’)和(5’－GAAGT………TCCCC－3’)两种引物的碱基序列分别与___________互补，且引物必须具有一定长度(如15-30个左右碱基)，以确保___________。
(2)切割慢病毒载体DNA，用___________酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。用重组载体去感染人淋巴瘤细胞，最终获得能稳定表达荧光素脂的淋巴瘤细胞。对获得的淋巴瘤细胞进行培养，培养温度应为___________，需要的气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是______________________。
(3)通过统计细胞数量，比较含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞(甲)和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞(乙)的生长情况，结果如图(a)，据图可看出这两种细胞生长趋势基本相似，说明___________；再分别取第5、6、7、8、9、10代的含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞，加入荧光素酶底物，检测荧光强度，结果如图(b)，说明_______________。
(4)将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠(无胸腺)体内，通过检测___________，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。
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科研人员将荧光素酶基因整合到慢病毒载体，利用载体将荧光素酶基因导入人淋巴瘤细胞。操作过程中含有以下几个过程：
（1）利用PCR技术扩增荧光素酶基因片段，首先需要设计两种引物，序列分别为（5'-CAACA·········AAAAC- 3'）和（5' -CAAGT·········TCCCC-3'）。
两种引物的碱基序列分别与_____________互补，且引物必须具有一定长度（如15一30个左右碱基），以确保_______________________。
（2）切割慢病毒载体DNA，用___________酶将其与荧光素酶基因连接，构建出荧光素酶慢病毒重组载体。用重组载体去感染人淋巴瘤细胞，最终获得能稳定表达荧光素酶的淋巴瘤细胞。对获得的淋巴瘤细胞进行培养，培养温度应为_________，需要的气体主要有O2和CO2，其中CO2的作用是__________________。
（3）通过统计细胞数量，比较含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（甲）和不含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞（乙）的生长情况，结果如图（a)，据图可看出这两种细胞生长趋势基本相似，说明________________；再分别取第5、6、7、8、9、10代的含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞，加人荧光素酶底物，检测荧光强度，结果如图（b），说明____________________。
（4）将含荧光素酶基因的淋巴瘤细胞注入裸鼠（无胸腺）体内，通过检测_________，可反映出小鼠体内肿瘤细胞的数量、大小和转移情况。
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