内皮祖细胞能分化为血管内皮细胞，促进血管新生，其损伤会导致严重的心血管疾病。为探究黄芪多糖...

内皮祖细胞能分化为血管内皮细胞，促进血管新生，其损伤会导致严重的心血管疾病。为探究黄芪多糖（APS）对内皮组细胞的保护作用，进行了以下实验。

（1）从血液中直接分离获得内皮祖细胞，在37℃恒温培养箱中进行培养，通入的空气应含____________以维持pH稳定。

（2）实验分组及处理

第1组：在EGM-2培养液中培养48h。

第2组：在EGM-2培养液中培养24h后，再加入1mg/mL脂多糖（LPS）继续培养24h。（加入LPS的目的是诱导内皮祖细胞的损伤）

第3组：在EGM-2培养液中加入0.8mg/mL APS培养24h后，加入______继续培养24h。

（3）细胞增殖能力检测

将上述处理好的各组细胞分别接种在多孔板中继续培养，测定96h内细胞数量的变化。（用OD值表示，数值越大表示细胞数量越多）

据此得出的结论是_______________。

（4）miRNA检测

miRNA与靶基因mRNA配对导致mRNA无法参与_____过程，从而实现对靶基因表达的调控。研究人员提取细胞中的总RNA，在_________酶的作用下合成cDNA，然后进行定量PCR，计算各种miRNA的含量，结果如下图所示：　　

推测LPS引起细胞损伤的原因是_________。APS在一定程度上能减轻这种损伤。

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黄芪多糖（APS）具有很好的降血糖作用。为了探究黄芪多糖的降糖机理，科研人员先用高热量饲料饲喂小鼠8周后，用小剂量链脲佐菌素注射小鼠，2周后测定血糖和血清胰岛素含量，筛选获得Ⅱ型糖尿病模型鼠。利用Ⅱ型糖尿病模型鼠进行APS降糖实验，主要处理及实验结果如下表（其中GLUT4为葡萄糖转运蛋白）。请回答：

（1）胰岛素可促进组织细胞________，从而实现降血糖功能。

（2）在培育Ⅱ型糖尿病模型鼠的过程中，长时间饲喂高热量饲料，可引起胰岛B细胞代偿性增殖，________增加，最终导致小鼠产生胰岛素抵抗。再给胰岛素抵抗小鼠注射小剂量链脲佐菌素以杀死部分________，快速获得Ⅱ型糖尿病模型鼠。

（3）本实验中，比较第1、3组实验结果说明____________；比较第1、2、4组实验结果可知，APS降血糖的机理是________________。

（4）本研究中制造Ⅱ型糖尿病模型鼠的过程给我们健康生活上的启示是____________。

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黄芪多糖（APS）具有很好的降血糖作用。为了探究黄芪多糖的降糖机理，科研人员先用高热量饲料饲喂小鼠8周后，用小剂量链脲佐菌素注射小鼠，2周后测定血糖和血清胰岛素含量，筛选获得II型糖尿病模型鼠。利用II型糖尿病模型鼠进行APS降糖实验，主要处理及实验结果如下表（其中GLUT4为葡萄糖转运蛋白）。请回答：

（1）胰岛素可促进组织细胞________，从而实现降血糖功能。

（2）在培育II型糖尿病模型鼠的过程中，长时间饲喂高热量饲料，可引起胰岛B细胞代偿性增殖，________增加，最终导致小鼠产生胰岛素抵抗。再给胰岛素抵抗小鼠注射小剂量链脲佐菌素以杀死部分_________，快速获得II型糖尿病模型鼠。请在答题纸相应位置的坐标图中绘制出模型鼠培育过程中小鼠空腹血糖的含量变化。________

（3）本实验中，比较第1、3组实验结果说明________；比较第1、2、4组实验结果可知，APS降血糖的机理是________。

（4）本研究中制造II型糖尿病模型鼠的过程给我们健康生活上的启示是________。

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科学研究发现，低氧诱导因子广泛存在于慢性缺氧细胞中，它可以通过调节促红细胞生成素基因的表达，诱导血管内皮细胞生成因子的增加，从而促进血管和红细胞生成。而新生成的毛细血管能进入肿瘤内部为癌细胞提供养料使癌症恶化。下列相关叙述正确的是（　　 ）

A.促进低氧诱导因子的降解可能会抑制癌细胞的生长

B.氧气充足有利于促红细胞生成素基因的表达

C.抑制低氧诱导因子的功能会改善贫血症状

D.心肌细胞生命活动旺盛，因而不会存在低氧诱导因子

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人的内皮抑素（一种蛋白质）能诱导血管内皮细胞凋亡，进而抑制新血管的产生。临床上通过静脉注射含有内皮抑素基因的腺病毒感染肿瘤细胞，使肿瘤细胞产生并释放内皮抑素，抑制新生血管的形成，使肿瘤细胞进人休眠状态并诱导其凋亡。

回答下列问题：

（1）从肝细胞中提取总mRNA,利用逆转录酶合成　　　　 ，根据内皮抑素基因的　　　　 设计并合成引物，利用PCR技术得到大量内皮抑素基因。

（2）在构建含内皮抑素基因的腺病毒并导人受体细胞的过程中，以　　　　 作为工具酶，以　　　　 作为载体。

（3）在进入临床使用前，需用体外培养的血管内皮细胞进行生理、病理检测。为获得大量的血管内皮细胞，首先用　　　　 酶处理血管内皮组织，使其分散成单个细胞，制成细胞悬液，然后将其放人含　　　　 等一些天然成分的合成培养基中培养。

（4）血管内皮细胞被重组腺病毒感染后，若通过　　　　 方法检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明内皮抑素基因得到表达且具有生物学活性。

（5）临床上将含内皮抑素基因的腺病毒通过静脉注射感染肿瘤细胞，使肿瘤生长受到抑制，这种治疗方法属于　　　　 （填“体内”或“体外”）基因治疗。

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［生物—选修3现代生物科技专题

人的内皮抑素（一种蛋白质）能诱导血管内皮细胞凋亡，进而抑制新血管的产生。临床上通过静脉注射含有内皮抑素基因的腺病毒感染肿瘤细胞，使肿瘤细胞产生并释放内皮抑素，抑制新生血管的形成，使肿瘤细胞进人休眠状态并诱导其凋亡。回答下列问题：

（1）从肝细胞中提取总mRNA,利用逆转录酶合成　　　　　 ，根据内皮抑素基因的　　　　　　 设计并合成引物，利用PCR技术得到大量内皮抑素基因。

（2）在构建含内皮抑素基因的腺病毒并导人受体细胞的过程中，以　　　　　　 作为工具酶，以　　　　　　　　 作为载体。

（3）在进入临床使用前，需用体外培养的血管内皮细胞进行生理、病理检测。为获得大量的血管内皮细胞，首先用　　　　　　 酶处理血管内皮组织，使其分散成单个细胞，制成细胞悬液，然后将其放人含　　　 等一些天然成分的合成培养基中培养。

（4）血管内皮细胞被重组腺病毒感染后，若通过　　　　　　 方法检测呈阳性并观察到细胞凋亡，则说明内皮抑素基因得到表达且具有生物学活性。

（5）临床上将含内皮抑素基因的腺病毒通过静脉注射感染肿瘤细胞，使肿瘤生长受到抑制，这种治疗方法属于　　　　　　 （填“体内”或“体外”）基因治疗。

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（12分）如图为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖 LPS 刺激后，升高血管内皮生长因子受体3（ VEGFR-3 ）和信号分子VEGF-C 的表达。VEGFR-3形成反馈环路，抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。

（1）细菌或细菌脂多糖 LPS在免疫学上相当于　　 ， TLR4的本质是　　 。

（2）过度或持续性的 TLR4 活化引起　　 ，在 VEGF-C 的刺激下，通过活化 PI3K-Akt1 通路，促进　　 ，从而抑制 NF-kB 活性，降低败血症的发生。

（3）该细胞能够产生溶菌酶直接杀死病原菌，该过程属于　　 免疫。吞噬细胞吞噬病菌后会发生死亡现象，该现象属于　　 。

（4）大多数抗原激发的体液免疫应答，第一种是必须有T细胞参与才能完成，第二种是有少数抗原物质，可单独刺激B细胞，为了探究细菌脂多糖LPS属于哪一类免疫应答，可以选择相同性别的同龄的小鼠进行LPS接种处理，如下表，实验组对应　　 组小鼠，如果　　 ，则该抗原属于第二种。

（5）一般情况下，接受抗原刺激的B细胞会增殖分化为　　 ，科学家用LPS分先后两次接种小鼠，并检测相应的抗体的产生量，如图所示：该实验结果说明LPS能够　　 。

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下图为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖 LPS刺激后，升高血管内皮生长因子受体3（ VEGFR-3 ）和信号分子VEGF-C 的表达。VEGFR-3形成反馈环路，抑制TLR4-NF-kB 介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。

（1）细菌或细菌脂多糖 LPS 在免疫学上相当于　　　　　 ， TLR4 的本质是 　　　　 。

（2）过度或持续性的 TLR4 活化引起 　　　　 ，在 VEGF-C 的刺激下，通过活化 PI3K-Akt1 通路，促进 　　　　 ，从而抑制 NF-kB 活性，降低败血症的发生。

（3）该细胞能够产生溶菌酶直接杀死病原菌，该过程属于 　　　　 免疫。吞噬细胞吞噬病菌后会发生死亡现象，该现象属于 　　　　 。

（4）大多数抗原激发的体液免疫应答，第一种是必须有T 细胞参与才能完成，第二种是有少数抗原物质，可单独刺激B 细胞，为了探究细菌脂多糖LPS 属于哪一类免疫应答，可以选择相同性别的同龄的小鼠进行LPS 接种处理，如下表，实验组对应 　　　　 组小鼠，如果 　　　　 ，则该抗原属于第二种。

（5）一般情况下，接受抗原刺激的B 细胞会增殖分化为 　　　　 ，科学家用LPS分先后两次接种小鼠，并检测相应的抗体的产生量，如图所示：该实验结果说明LPS 能够 　　　　 。

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肿瘤血管生长是肿瘤生长的关键环节，血管内皮生长因子（VEGF）是一种参与促进肿瘤血管生长的蛋白质，VEGF作为治疗癌症的靶分子受到了很多研究者的关注。

（1）VEGF 的受体存在于血管内皮细胞的_____，可促进血管内皮细胞的_______，形成的细胞最终构成新的血管。

（2）研究者利用噬菌体文库筛选能与VEGF特异性结合的多肽。过程如下。

①将人工合成的编码随机六肽的基因插入噬菌体DNA，形成重组DNA分子，用重组DNA分子转化大肠杆菌，大肠杆菌经培养后裂解，产生噬菌体。这些噬菌体构成一个文库，一个包含所有可能六肽的噬菌体文库至少有____种噬菌体组成，在这些噬菌体中可能有某种六肽能与VEGF特异性结合（图一）。

②将VEGF能够与受体结合的部位固定在微孔容器底部，在微孔中加入随机肽文库，一段时间后用缓冲液洗去不能与VEGF结合的噬菌体，然后用含有_____的缓冲液将结合在微孔底部的噬菌体洗脱下来，这种分子能够与微孔容器底部的分子竞争性结合噬菌体，这说明噬菌体与目标分子的结合是_____（可逆或不可逆）的。

③将洗脱下来的噬菌体转入另一试管，加入_____，经过一段时间振荡培养，产生新一代噬菌体库。

④重复步骤②③多次。

（3）在多轮实验后产生的噬菌体文库比第一代噬菌体文库与VEGF的结合能力更强，文库中噬菌体的种类_____，请分析原因：_____。

（4）欲证明筛选到的多肽X能够起到抑制肿瘤生长的作用，研究者设计了这样的实验：将多肽X溶液注射到⼀只肿瘤模型小鼠体内，（肿瘤型鼠是天然条件下就会产生肿瘤的小鼠品系），检测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。

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下图为巨噬细胞炎症反应的新机制研究，巨噬细胞受细菌感染或细菌脂多糖LPS刺激后，升高血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3）和信号分子VEGF-C的表达。最终可以实现抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应，降低细菌感染导致的败血症的发生。结合下图，相关分析错误的是：

A.VEGFR-3的化学本质最可能是糖蛋白，细菌的脂多糖LPS属于抗原

B.抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应是通过抑制NF-kB的表达来实现

C.若该细胞通过产生的溶菌酶直接杀死细菌，则该过程属于特异性免疫

D.抑制TLR4-NF-kB介导的炎症反应存在VEGFR-3和VEGF-C的反馈

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