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神经纤毛蛋白-1 (NRP-1) 是一种多功能糖蛋白，在多种肿瘤组织中呈高表达，可与血管内皮生长因子结合促进肿瘤血管的形成，使肿瘤体积增大。科研人员通过制备NRP-1单克隆抗体，开展对小鼠的乳腺癌肿块进行靶向治疗的研究。请分析回答：
（1）制备单克隆抗体涉及的动物细胞工程常用技术手段有_________________________(写出两项)。
（2）制备时，首先给小鼠注射___________________________，分离得到B细胞。将B细胞与骨髓瘤细胞诱导融合后得到杂交瘤细胞，经系列处理选出______________________细胞注射到小鼠腹腔中，从腹水中提取到大量的NRP-1单克隆抗体。
（3）为了论证制取的单克隆抗体的治疗效果，研究者选择生长状况一致的小鼠，分别注射等量的乳腺癌细胞悬液，经饲养后，各小鼠均形成了体积基本相同的肿瘤。
①将上述小鼠随机分成实验组和对照组，实验组和对照组应分别注射____________，___________________，且每隔3天重复进行相同的注射操作，一段时间后测算发现，实验组小鼠的肿瘤体积都小于对照组，原因可能是_________________________发生特异性结合，阻断了___________________________的结合，从而抑制了肿瘤内血管生成，导致肿瘤体积减小。
②上述实验小鼠应选用没有___________________(器官)的动物模型鼠，由于这种鼠存在免疫缺陷，实验时可以避免小鼠的免疫系统对NRP-1单克隆抗体和乳腺癌肿块进行攻击，从而保证实验结果更可靠。
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神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，经实验证明，与正常组织细胞相比，NRP-1在乳腺癌（MCF7）细胞中高表达，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成，进而促进肿瘤体积的增长。本研究将为 NRP-1 单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。
（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，运用____________________技术获得 MCF7 细胞用于后续实验。用人的_____________________蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，制备杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取培养孔中的________________（填上清液或沉淀细胞），应用_________________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得 NRP-1 单克隆抗体（NRP-1 MAb）。
（2）将 MCF7 细胞制成单细胞悬液，等量注入 4 组裸鼠（即无胸腺裸鼠）右前腋下，接种后 3 天开始给药NRP-1 单克隆抗体（NRP-1 MAb），共给药 7 次，对照组注射等量的生理盐水。每隔 5 天测算一次肿瘤的体积，如下图所示：
从上图中可以看出_________________________
（3）结合题干信息，综合以上研究请你推测 NRP-1 MAb 抑制肿瘤的作用机理是_____________________。
（4）注射不同剂量 NRP-1 MAb 33 天后，剥离肿瘤组织称重，实验结果如下图：
从该结果中可以看出___________________________。综合比较（3）和（5）的实验结果，可见中高剂量和低剂量的 NRP-1 MAb 在降低肿瘤体积和降低肿瘤重量上出现了不一致性。通过实验研究，有助于指导实践中科学用药。
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神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。本研究将为NRP-1单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。
（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，运用__________技术获得MCF7细胞用于后续实验。用重组的人_________蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，制备杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取培养孔中的__________（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用__________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得NRP-1单克隆抗体（NRP-1 MAb）。
（2）提取正常组织细胞和MCF7细胞的总蛋白，设置空白对照，加入NRP-1 MAb进行蛋白质免疫印迹，实验结果如下：
该实验结果说明了__________。
（3）将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药，共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的体积，如下图所示：
对照组注射__________，从上图中可以看出__________。
（4）结合题干信息，综合以上研究请你推测NRP-1 MAb抑制肿瘤的作用机理是__________。
（5）注射不同剂量NRP-1 MAb 33天后，剥离肿瘤组织称重，实验结果如下图：
从该结果中可以看出____。综合比较（3）和（5）的实验结果，可见中高剂量和低剂量的NRP-1 MAb在降低肿瘤体积和降低肿瘤重量上出现了不一致性。
（6）基于以上研究，科学家们对该抗体的用药方式有两种观点：谨慎用药和适宜浓度用药。你支持哪个观点，并说出理由______。
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神经纤毛蛋白-1（NRP-1）是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。本研究将为NRP-1单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。
（1）取乳腺癌（MCF7）组织块，运用__________技术获得MCF7细胞用于后续实验。用重组的人_________蛋白对小鼠进行注射，使小鼠产生免疫反应，制备杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取培养孔中的__________（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用__________技术进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得NRP-1单克隆抗体（NRP-1 MAb）。
（2）提取正常组织细胞和MCF7细胞的总蛋白，设置空白对照，加入NRP-1 MAb进行蛋白质免疫印迹，实验结果如下：
该实验结果说明了__________。
（3）将MCF7细胞制成单细胞悬液，等量注入4组裸鼠右前腋下，接种后3天开始给药，共给药7次。每隔5天测算一次肿瘤的体积，如下图所示：
对照组注射__________，从上图中可以看出__________。
（4）结合题干信息，综合以上研究请你推测NRP-1 MAb抑制肿瘤的作用机理是__________。
（5）注射不同剂量NRP-1 MAb 33天后，剥离肿瘤组织称重，实验结果如下图：
从该结果中可以看出____。综合比较（3）和（5）的实验结果，可见中高剂量和低剂量的NRP-1 MAb在降低肿瘤体积和降低肿瘤重量上出现了不一致性。
（6）基于以上研究，科学家们对该抗体的用药方式有两种观点：谨慎用药和适宜浓度用药。你支持哪个观点，并说出理由______。
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神经纤毛蛋白-1 （ NRP-1） 是血管内皮生长因子的新型受体，通过参与多种信号转导来促进肿瘤血管的生成。本研究将为 NRP-1 单克隆抗体靶向治疗乳腺癌提供数据基础。
（1）取乳腺癌 （MCF7）组织块，运用_____技术获得 MCF7 细胞用于后续实验。 用重组的人_____蛋白对小鼠进行注射， 使小鼠产生免疫反应， 制备杂交瘤细胞，将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取培养孔中的________（填“ 上清液”或“沉淀细胞”），进行抗体阳性检测。经多次筛选和细胞培养，获得 NRP-1 单克隆抗体 （ NRP-1 MAb） 。
（2）将 MCF7 细胞制成单细胞悬液，等量注入 4 组裸鼠右前腋下，接种后 3 天开始给药， 共给药 7 次。每隔 5 天测算一次肿瘤的肿瘤体积，如下图所示。
对照组注射_____，从上图中可以看出_____。
（3）注射不同剂量 NRP-1 MAb 33 天后，剥离肿瘤组织称重，实验结果如下图：
该结果表明____________________________________________________。
（4）基于以上研究，科学家们对该抗体的用药方式有两种观点：谨慎用药和适宜浓度用药。 你支持哪个观点，并说出理由___________________________________。
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血管内皮生长因子（VEGF）是在肿瘤细胞中通过表达，分泌到血液中的蛋白类生长因子，促进肿瘤血管的生成，进而为肿瘤组织生长提供足够的氧气和营养物质。
研究人员利用pVAX1质粒和VEGF基因构建了PVAX1—VEGF的DNA疫苗，为肿瘤免疫治疗奠定基础。回答下列问题：
（1）首先从人的肺癌细胞株A549中提取mRNA，通过_______法获得VEGF基因。
（2）对获取的VEGF基因进行PCR扩增前，需要根据VEGF基因序列设计两种引物，其原因是_________。为便于VEGF基因与质粒pVAX1连接，引物中要增加适当的__________。扩增时，每个循环一般需要经过“变性、退火、延伸”三个过程，其中______过程的温度设定是扩增成败的关键。
（3）构建的PVAX1—VEGF上应含有特定的______（填“复制原点”或“启动子”或“标记基因”），它能被受体细胞的_______所识别，以便于催化转录过程。
（4）DNA疫苗制备简单，价格低廉，且免疫强度高，应答持久，但同时也可能存在着不可忽视的潜在危险。你认为可能存在的潜在危险是________________。
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肿瘤血管生长是肿瘤生长的关键环节，血管内皮生长因子（VEGF）是一种参与促进肿瘤血管生长的蛋白质，VEGF作为治疗癌症的靶分子受到了很多研究者的关注。
（1）VEGF 的受体存在于血管内皮细胞的_____，可促进血管内皮细胞的_______，形成的细胞最终构成新的血管。
（2）研究者利用噬菌体文库筛选能与VEGF特异性结合的多肽。过程如下。
①将人工合成的编码随机六肽的基因插入噬菌体DNA，形成重组DNA分子，用重组DNA分子转化大肠杆菌，大肠杆菌经培养后裂解，产生噬菌体。这些噬菌体构成一个文库，一个包含所有可能六肽的噬菌体文库至少有____种噬菌体组成，在这些噬菌体中可能有某种六肽能与VEGF特异性结合（图一）。
②将VEGF能够与受体结合的部位固定在微孔容器底部，在微孔中加入随机肽文库，一段时间后用缓冲液洗去不能与VEGF结合的噬菌体，然后用含有_____的缓冲液将结合在微孔底部的噬菌体洗脱下来，这种分子能够与微孔容器底部的分子竞争性结合噬菌体，这说明噬菌体与目标分子的结合是_____（可逆或不可逆）的。
③将洗脱下来的噬菌体转入另一试管，加入_____，经过一段时间振荡培养，产生新一代噬菌体库。
④重复步骤②③多次。
（3）在多轮实验后产生的噬菌体文库比第一代噬菌体文库与VEGF的结合能力更强，文库中噬菌体的种类_____，请分析原因：_____。
（4）欲证明筛选到的多肽X能够起到抑制肿瘤生长的作用，研究者设计了这样的实验：将多肽X溶液注射到⼀只肿瘤模型小鼠体内，（肿瘤型鼠是天然条件下就会产生肿瘤的小鼠品系），检测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。测VEGF与VEGF受体的结合能力。请对该实验做出评价并加以完善___________________________________。
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科学研究发现，低氧诱导因子广泛存在于慢性缺氧细胞中，它可以通过调节促红细胞生成素基因的表达，诱导血管内皮细胞生成因子的增加，从而促进血管和红细胞生成。而新生成的毛细血管能进入肿瘤内部为癌细胞提供养料使癌症恶化。下列相关叙述正确的是（ ）
A.促进低氧诱导因子的降解可能会抑制癌细胞的生长
B.氧气充足有利于促红细胞生成素基因的表达
C.抑制低氧诱导因子的功能会改善贫血症状
D.心肌细胞生命活动旺盛，因而不会存在低氧诱导因子
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（10分）【生物——现代生物技术专题】
内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导人羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoR I、SaII、SphI为限制酶。
请据图回答。
（1）在构建基因表达载体的过程中，应采用____（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是____。
（2）要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的____筹调控组件重组起来，构建基因表达载体。
（3）图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是____。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②____技术可培育成转基因克隆山羊。
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内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量。科学家将该基因导入羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊。技术流程如下图，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ为限制酶。
请据图回答。
⑴在构建基因表达载体的过程中，应采用______（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒。其中绿色荧光基因的作用是______。
⑵要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的______等调控组件重组起来，构建基因表达载体。
⑶图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是______。将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②______技术可培育成转基因克隆山羊。
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