对RNA病毒进行核酸检测需要通过PCR技术进行扩增，其周期长、专业技术和设备要求高，很多科...

对RNA病毒进行核酸检测需要通过PCR技术进行扩增，其周期长、专业技术和设备要求高，很多科研单位开发了能快速进行病毒检测的免疫试剂盒。下图是某科研人员提出的制备检测病毒的单克隆抗体的技术路线。下列说法错误的是（　　 ）

A.RNA病毒的核酸检测需要用到逆转录酶

B.给动物注射的抗原A是病毒的RNA

C.图中a表示对杂交瘤细胞的克隆化培养

D.可用聚乙二醇作为细胞融合的促融剂

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2020年初，我国出现了传染性很强的新冠肺炎，大量的疑似病例待确定，快速的进行检测和确诊非常重要。下面是两类常用的检测方法，请

（1）核酸检测法，如图所示：

①新冠病毒的RNA不能直接进行PCR扩增，必须先经过__________成为DNA。进行PCR扩增时，使用的引物作用是_________________________。

②图中的探针信号检测又称为___________________________________技术，利用了__________的原理。

（2）间接免疫荧光法：把受感染的细胞固定在一个小玻片上，这个玻片上有冠状病毒，然后把病人的血清滴在小玻片上，若血清中有跟这个病毒反应的抗体，二者就可以结合，然后滴上另外一种带有荧光的试剂，在荧光显微镜下，玻片会有荧光显现。请回答以下问题：

①上述检测方法是利用了____________杂交法。

②如果病人血清中有跟这个病毒反应的抗体，说明病人体内发生了_______________免疫，通过__________细胞产生了特异性抗体。

③快速检测新冠肺炎时，在荧光显微镜下，玻片有荧光显现，说明___________。

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新型冠状病毒（2019-nCoV）的核酸检测使用逆转录PCR技术。将待测样本处理后，先将样本RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板进行扩增。请据此回答下列问题：

（1）样本RNA逆转录成cDNA的原料是_________。

（2）逆转录PCR反应中使用的DNA聚合酶是从水生栖热菌中分离提取，该DNA聚合酶优势在于_________。

（3）下表是用于2019-nCoV的cDNA扩增的两种引物序列。

①引物1对应的模板链序列（3'—5'）为_________。

②下图为cDNA的部分序列，引物1和引物2对应的位置是_________（选填Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ）

（4）PCR技术获取目的基因的优势是_________。

（5）目前_________（选填“能”或“不能”）利用2019-nCoV的遗传物质作为基因工程的载体，请说明原因_________。

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新型冠状病毒（COVID-19）的核酸检测采用逆转录PCR技术。先将样本RNA逆转录成cDNA，再以DNA为模板进行扩增。请据此回答下列问题：

（1）样本RNA逆转录成DNA的原料是______________________。

（2）逆转录PCR反应中使用的DNA聚合酶是从水生栖热菌Thermus Aquaticus（Taq）中分离提取。该菌分离提取的DNA聚合酶优势在于_____________。

（3）逆转录PCR反应中热变性过程DNA结构的变化是__________________________。

（4）下表是用于COVID-19的cDNA扩增的两种引物序列，请据表回答相关问题：

①引物1对应的模板链序列为________________。

②下图为cDNA的部分序列，请问引物1和引物2分别对应的位置是_________

A．Ⅰ和Ⅱ　　　　　 B．Ⅰ和Ⅲ　　　　　 C．Ⅲ和Ⅳ　　　　　 D．Ⅱ和Ⅲ

（5）PCR技术获取目的基因的优势是________________________________。

（6）能否利用COVID-19的遗传物质作为基因工程的载体?请说明原因_____________________。

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通过咽拭子取样进行RT-PCR技术检测是目前临床上诊断新型冠状病毒感染疑似患者的常用方法，用于核酸检测的RT-PCR试剂盒的部分工作原理简图如下。回答下列问题：

（1）RT-PCR是指以病毒的RNA为模板通过_________过程合成cDNA，并对cDNA进行PCR扩增的过程。进行RT-PCR过程中，需要加入的酶有__________。

（2）利用RT-PCR试剂盒对新型冠状病毒进行检测时，除借助上述RT-PCR技术外，还需要有特异性探针。制作该探针的依据是__________，利用该探针对新型冠状病毒进行检测的原理是___________。

（3）除核酸检测外，研究人员还研发了基于病毒蛋白的检测技术，该项技术的关键是生产出能与新冠病毒结合的特异性抗体。生产该种抗体的大致方案如下：

①向小鼠体内注射新冠病毒的抗原蛋白；

②分离免疫小鼠的B淋巴细胞，并与小鼠的骨髓瘤细胞融合，多次筛选、检测，最终获得所需杂交瘤细胞；

③将获得的杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养，获得大量的特异性抗体。

上述生产抗体的方案中使用的技术手段有__________，其中步骤②中获得的杂交瘤细胞具有__________等特点；步骤③中为防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，应采取的措施是__________。

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科研人员借助恒河猴的抗艾滋病基因对家猫DNA进行改造，同时利用荧光水母的基因培育出抗艾滋荧光猫，以期找到治疗艾滋病的新方法。

（1）通过PCR技术可在体外大量扩增抗艾滋病毒基因。该扩增过程需要的引物实质上是一种_______，需要加入的酶是_______，PCR与体内DNA复制的不同之处主要表现在温度环境，在PCR中先用90℃高温处理的目的是_______，而这一过程在细胞中是通过_______实现的。

（2）抗艾滋荧光猫又称试管动物，其生殖方式属于________。要使得体外受精获得成功，在卵子受精之前要对精子进行________处理。若要在短时间内生产大量的抗艾滋荧光猫，可采用的技术是______，操作时要注意___________。

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我国公布的禁止进境检疫的有害生物烟草环斑病毒(TRSV)是RNA病毒。检疫部门取烟草叶片进行该病毒的诊断和检测，将待测样品利用RTPCR技术(逆转录PCR，具有灵敏度高、特异性强的优势)扩增样品。下图1是RTPCR技术的过程示意图，图2是PCR扩增产物的电泳图。请回答下列问题：

(1) 图1过程①表示利用RNA获得cDNA，该过程需要________酶的参与，过程②需要加入________酶。

(2) 待测样品中RNA的提供者可能是________和________，也可能只是________。

(3) 图1过程①需要加入引物P2，该引物是依据________________的序列设计并生产的。过程②引物P2、P1都需加入，理由是__________________________。

(4) 已知图2中电泳带1是取自未感染的烟叶样品电泳结果，电泳带2是不同大小DNA的标准参照，据图分析可以得出的结论是________，理由是______________________________。

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基因工程的相关技术可用于病毒检测，也可用于制备疫苗。利用荧光PCR技术检测是否感染某种RNA病毒时，基本操作流程为：提取病毒的RNA→荧光PCR扩增反转录DNA→荧光检测。请回答下列问题：

（1）分离病毒的RNA通常在冰浴条件下进行，目的是抑制________________的活性，防止病毒的RNA降解。荧光PCR反应体系中需要加入的酶和原料是________________。为保证反应体系只扩增病毒特异性核酸序列，应先根据病毒的特异性核酸序列设计________________。

（2）荧光染料能掺入DNA双链中发出荧光，在游离状态下不发出荧光。若检测到荧光量达到某个临界值，则代表阳性，说明________________________________。若检测出现“假阴性”现象，原因可能是________________________________。

（3）某病毒的E蛋白和P蛋白会引起机体产生特异性免疫反应。构建重组活病毒载体疫苗时，获取某病毒的________________插入腺病毒的基因组中。通过重组腺病毒感染动物可使其获得免疫力，原因是________________________________________________。

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目前广泛应用的新型冠状病毒检测方法是实时荧光RT-PCR技术。RT—PCR是将RNA逆转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术，具体过程如图所示，下列说法不正确的是（　　 ）

A.引物A与引物B应该具有不同的碱基序列

B.过程Ⅱ通过控制温度的变化实现目标序列的循环扩增

C.该反应体系中应加入缓冲液、引物、四种核糖核苷酸、逆转录酶、Taq酶等物质

D.该检测方法的应用依赖于新型冠状病毒特异性序列的确定

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RT- PCR技术是确诊新冠肺炎患者的核酸检测手段（如图），该技术首先将病毒COVID-19的核酸通过逆转录形成DNA，然后以此DNA链为模板进行体外DNA复制，反应体系中加入的荧光基团会使目标DNA发光，从而被仪器检测到。下列叙述错误的是（　　 ）

A.病毒COVID- 19的遗传物质中含有尿嘧啶核苷酸

B.检测过程中需要核糖核苷酸和脱氧核苷酸做为原料

C.RT- PCR反应体系中含有逆转录酶和DNA聚合酶

D.相同反应时间内目标DNA含量与病毒含量呈正相关

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