人畜粪便中含有大量的大肠杆菌，人们常用大肠杆菌作为判断自来水是否被粪便污染的指示菌，我国规...

人畜粪便中含有大量的大肠杆菌，人们常用大肠杆菌作为判断自来水是否被粪便污染的指示菌，我国规定1000mL自来水中的大肠杆菌数不得超过3个。环境监测部门利用“滤膜法”对某河流水体进行了大肠杆菌活菌数目的测定。请回答下列问题：

（1）培养大肠杆菌，人们常用LB培养基，其配方是：蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠10g，将上述物质溶解后用蒸馏水定容至1000mL，调节pH为7。该培养基中为细菌提供碳源的物质是_______，对该培养基灭菌通常采用的方法为__________________。

（2）为了便于统计水体中活菌的数目，常常将水样进行稀释。如果要得到101倍的稀释液可以取水样1 mL加入无菌水________mL 制成，并依次制备系列梯度的稀释液。每个稀释倍数的菌液取10 mL进行过滤，然后将滤膜放置在固体培养基上。为了_______，稀释、过滤和旋转滤膜等操作都应该在酒精灯火焰附近进行。

（3）将放有滤膜的平板在适宜条件下培养，每隔12 h统计一次菌落数目，应选取菌落数目________时的记录作为结果。如果经过培养后稀释倍数为102的5个平板上菌落数分别为21、27、35、37、45，那么每升河水中约含大肠杆菌_______个。用这种方法测定的细菌数量比实际活菌数量要_______，这是因为_______。

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大肠菌群常作为水体受粪便污染的指示菌，饮用水的卫生标准是100mL中不得检出大肠菌群。欲确定饮用水是否合格，可采用滤膜法检测饮用水中的大肠菌群，过程如下图，以下说法错误的是（　　 ）

A.滤膜的孔径大小应该可以允许大肠菌通过

B.完成过滤后需将滤膜的A面接触配置好的培养基

C.可通过菌落特征鉴定是否为大肠杆菌

D.与稀释涂布平板法相比，此方法的优势是可一次对较多水样进行检测

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大肠杆菌是基因工程常用的受体菌。它既可生活在人和动物肠道内，又可随粪便排出污染环境，因而常用作饮水和食物（或药物）的卫生学标准（国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）。请回答下列与大肠杆菌有关的问题：

（1）从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于________；从生存环境分析推测，它的新陈代谢类型应该是________。

（2）某研究性学习小组对本校自来水进行了检测。一同学用无菌吸管吸取1 mL水样至盛有________ mL无菌水的试管中，得到10¹倍稀释的样品；依次稀释，得到10²、10³倍稀释的样品；把每种稀释度的样品分别接种到3个平板培养基上培养，最后统计菌落数。若3种稀释度的平均菌落数分别为402、30、2，应以_______倍稀释的样品来计算水样中的菌体数；若接种量均为0.1 mL，则该水样中大肠杆菌超标_______万倍。

（3）下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。根据用途划分该培养基属于________(选择/鉴别)培养基。该培养基中的碳源是________。

（4）培养大肠杆菌时，常用的接种方法是平板划线法和______________。为防止杂菌污染需要对培养基和培养皿进行____________。

（5）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是________(双选)。

A．制作果酒      B．由果酒制作果醋      C．制作泡菜      D．制作腐乳

（6）利用培养基不仅可以分离培养微生物，也可以进行植物组织培养。与微生物培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入________。

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我国《生活饮用水卫生标准》中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定如下：细菌总数1mL水中不超过100个，大肠杆菌数1mL水中不超过3个。为了检验某城市自来水是否达标，某生物兴趣小组进行了相关的实验。下列有关叙述错误的是（　　 ）

A.实验过程中应用到涂布器、移液管等操作工具

B.取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样

C.检验自来水中大肠杆菌数是否达标，可用稀释涂布平板法来分离并计数

D.若空白对照组上有6个菌落，则在实验组数据基础上减去6，以获得最准确数据

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三位高中生在某个炎热夏日相约去吃冰激凌，之后两人都出现腹泻现象，于是他们怀疑冰激凌中的大肠杆菌含量超标。老师建议他们利用所学有关微生物培养的知识对冰激凌进行检测。经查阅资料后，他们提出如下实验设计思路。

立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同种冰激凌；配制伊红-亚甲基琼脂培养基（该培养基可用来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈现深紫色，并有金属光泽）、灭菌、倒平板；取10mL刚融化的冰激凌作为原液，然后进行梯度稀释，稀释倍数为1×10～1×105；取每个浓度的冰激凌液各0．1mL，用涂布平板法进行接种，每个浓度涂3个平板；在适宜温度下培养48小时，统计菌落数目。

（1）请你从下面3个角度对这三位同学的思路进行评议。

① 他们只打算对一个冰激凌进行检测，理由是：两个人吃过冰激凌后，都腹泻了，所以再检测一个就足以说明问题。你同意这样的观点吗？请阐述理由__________________。

② 有没有必要对冰激凌原液进行梯度稀释？请阐述理由____________________。（提示：我国卫生部门规定的饮用水标准是：37oC培养24h的条件下1mL自来水中细菌总数不可以超过100个；37oC培养48h的条件下1000mL自来水中大肠杆菌菌落不能超过3个）

③ 他们认为，在用该方法统计菌落数目时不需要设计对照组，所以只准备培养15个平板。你认为在这项检测中是否需要对照组？请阐述理由__________________。

（2）下图所示为4种菌落分布图，一般不能由涂布平板法得到的是_______。

（3） 如果以菌落数代表样品中的大肠杆菌数量，则统计结果比实际值是偏大还是偏小？请阐述理由__________________。

（4）如果实验结果显示检测的冰激凌中大肠杆菌超标了，接下来他们应该做什么？_____。

（5）2020年5月1日起，北京市实行新版《北京市生活垃圾管理条例》，在下列垃圾类别中，冰激凌包装袋、雪糕棒等属于_______。

A、厨余垃圾     B、可回收物     C、有害垃圾     D、其他垃圾

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测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。其大致流程是：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上一将滤膜转移到含有伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目，流程示意图如下图所示。其中，指示剂伊红美蓝可使大肠杆菌菌落呈现紫黑色。请回答下列问题：

（1）过滤待测水样需要用到滤杯、滤膜和滤瓶，其中需要进行灭菌处理的是______________。与过滤有关的操作都要在______________旁进行，以防杂菌污染。

（2）将完成过滤之后的滤膜用无菌镊子夹起紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的 __________操作。经灼烧后的无菌镊子，需等其冷却后才能夹起滤膜，理由是______________。从功能角度分析，EMB培养基属于______________培养基。

（3）某生物兴趣小组的同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为120，紫黑色菌落数平均为40，则推测1L待测水样中的大肠杆菌数目为______________。

（4）该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。若要测定待测水样中酵母菌的数目，应更换上述过滤装置中的滤膜，选择孔径______________（填更大或更小）的滤膜。

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在缤彩纷呈的生物世界，微生物似乎显得过于微小与沉寂，它们在自然界却作用非凡，很多生命现象都与微生物有着千丝万缕的联系。

（1）幽门螺杆菌是急慢性胃炎的主要致病菌，它能分解尿素，在菌体周围形成一层保护性“氨云”，中和胃酸，定植致病。将患者体内采集的样本制成菌液，培养在以尿素为唯一氮源的___________（填“选择”或“鉴别”）培养基上进行“浓缩”。与固体培养基相比，液体培养基更适于“浓缩”培养的原因是___________。若培养基中加入酚红指示剂，则该菌落周围会出现__________环带，这与菌体内____________的作用密切相关。

（2）大肠杆菌数目是否超标可以作为食品卫生和水源污染度的检测指标，大肠杆菌的数目可以通过滤膜法来测定：将一定体积的样品过滤后，将滤膜放在添加__________试剂的培养基上培养，大肠杆菌的菌落呈现___________色，根据该菌落的个数判定饮用水是否污染。

（3）分离纯化大肠杆菌最常用的方法是___________和__________，如图为连续划线法示意图，在图中___________（填图中序号）区域更易获得单菌落，原因是_______________________________。

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大肠杆菌是寄生于人肠道内的一种细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应而使菌落呈紫黑色。测定水样是否符合饮用水的卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的总数。滤膜法的大致流程如下图1所示。请回答下列问题：

（1）据题意分析，图中培养基除了加入水、碳源、氮源和无机盐为大肠杆菌生长繁殖提供营养物质外，还需添加_______________和伊红美蓝。

（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌入侵，本实验中所使用的培养皿等玻璃器皿的常用灭菌方法有_____________。

（3）在无菌操作条件下，将10 mL待测水样加入到90 mL无菌水中，稀释后的菌液通过滤膜法测得伊红美蓝培养基上的菌落数平均为124个，紫黑色菌落数平均为29个，推测1L待测水样中的大肠杆菌总数约为____________个。

（4）若饮用水中大肠杆菌超标，可引发多种感染。为了研究不同浓度的甲抗生素对A、B两种大肠杆菌的抑菌效果，做如下实验。　　

I．取稀释后的A、B两种大肠杆菌菌液少许，分别与溶化并冷却至45℃左右的培养基混匀后倒平板各5个；

II．待平板凝固后，在每个平板中央的培养基里各打一个直径为3mm的孔，并在孔中分别加入不同浓度的甲抗生素

III．在适宜条件下培养一段时间，可在孔的周围观察到一圈清晰区，按图2所示测量清晰区的直径，数据如下表。

①由表1数据可知，甲抗生素对A、B大肠杆菌的增长都有抑制作用，但_______大肠杆菌对甲抗生素敏感性较强。判断依据是_____________。

②为了更准确地说明清晰区的出现是因为甲抗生素的作用，本实验还需增设一组在上述平板孔内加入 _____________作为对照。

③本实验需将上述接种后的平板与_______________在相同条件下培养，以检查培养基灭菌是否合格以及培养过程中是否受到杂菌污染。

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如表为某培养基的配方，下列有关叙述正确的是（　　 ）

A.此培养基是天然鉴别培养基

B.能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因

C.此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中

D.此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准

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我国饮用水卫生标准规定每毫升水样中细菌总数不得大于100个，大肠杆菌不得检出。某兴趣小组为检测本地自来水中的细菌总数和是否有大肠杆菌，进行了如下实验：

①分别配制营养琼脂培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、水）和伊红美蓝培养基（成分：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红、美蓝、水），灭菌

②取水样

③先测定甲项指标：用灭菌吸管吸取1mL水样，涂布到营养琼脂培养基中；置于37℃培养24h后进行菌落计数。另设一个空白对照组。

④用滤膜法测定乙项指标，装置和操作如图

回答下列问题：

（1）步骤②取水样前为了对自来水龙头灭菌，应对它作____________________________处理。

（2）步骚③测定的指标甲是____________________________。水样涂布前无需稀释，原因可能是____________________________________。步骤③中的空白对照组应是：____________________________________。

（3）步骚①测定乙项指标，主要观察滤膜上是否会出现_________色菌落。

（4）兴趣小组认为合格的自来水中细菌数量很少，担心检测不到，因而将取得的水样先加入到无琼脂的营养培养液中培养一段时间后，再稀释涂布平板计数。这样操作获得的数据_________（填“可信”或“不可信”）。理由是____________________________________。

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