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下列关于基因工程载体的叙述中，正确的是
A．构建基因文库时不需要载体
B．载体都是环状DNA分子
C．有一至多个限制酶切割位点
D．只来自于原核细胞
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下列关于基因工程载体的叙述中，正确的是（ ）
A．构建基因文库时不需要载体 B．载体都是环状DNA分子
C．有一至多个限制酶切割位点 D．只来自于原核细胞
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基因工程的核心是构建表达载体。下列各项中不是表达载体必须具备的条件是（ ）
A.能在宿主细胞内自主复制
B.多个抗生素抗性基因
C.多个限制性核酸内切酶切割位点
D.具有控制质粒DNA转移的序列
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下列关于基因工程的叙述，正确的是( )
A. 构建表达载体时需要在目的基因前加上起始密码子
B. 农杆菌转化法可以将目的基因随机插入受体细胞的染色体DNA上
C. 标记基因中不能有限制酶的识别位点以防止其被破坏而失去作用
D. 导入人胰岛素基因的大肠杆菌可直接生产出有活性的人胰岛素
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图是利用正常大鼠制备转基因大鼠的流程示意图，回答下列问题。
（1）质粒是环状DNA分子，没有游离端。当质粒用限制酶切割一次以后，形成 个黏性末端，若在构建基因表达载体时，选用同种限制酶来切割目的基因和质粒，再用连接酶连接两者之间的黏性末端，则会出现部分转基因大鼠中目的基因不能正确表达的情况，其最可能的原因是 。
（2）卵母细胞除从活体 中采集外，还可以从处死的雌鼠卵巢中获取，采集到的精子必须经过 处理后，才能与卵母细胞结合，完成受精作用。
（3）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是 、早期胚胎培养和胚胎移植。
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基因工程重要环节是构建基因表达载体。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列和切割位点，图2表示DNA片段，图3表示目的基因及限制酶切点，图4表示质粒。请回答下列问题：
（1）若图2就是图1中的最左边显示的三个碱基对，则④⑤⑥⑦⑧⑨对应的碱基依次是_________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切开的位置是图2中编号为______位置的________键。
（2）图3中的A、B、C、D为与目的基因两端配对的四种单链DNA片段，在不同情况下可以作为引物，在PCR技术中，扩增此目的基因，应该选用________两个作为引物。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生目的基因片段__________个。
（3）图4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ对此质粒进行三种方法切割。第一种方法用其中一种酶、第二种方法用其中两种酶、第三种方法用其中三种酶分别切割，依次产生_______、_______、_____三种片段，三种方法总共可以形成________种不同的片段，其中含有完整抗四环素基因的DNA片段有______种。
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用 限制酶XbaI和SacI（两种酶切出的粘性末端不同）切割某DNA，获得含目的基因的片段。若利用该片段构建基因表达载体，应选用下图中的Ti质粒是
注：图中箭头所指的位置是限制酶识别和切割的位点
A.
B.
C.
D.
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在用基因工程技术构建抗除草剂转基因烟草过程中，下列操作不正确的是
A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸
B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C．将重组DNA分子导入烟草原生质体
D．用含抗生素的培养基筛选转基因烟草细胞
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下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是
A．需要限制酶和DNA连接酶
B．必须在细胞内进行
C．抗生素抗性基因可作为标记基因
D．启动子位于目的基因的首端
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下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是
A.需要限制酶和DNA连接酶 B.必须在细胞内进行
C.抗生素抗性基因可作为标记基因 D.启动子位于目的基因的首端
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